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急，细菌基因组DNA提取
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用试剂盒提取的细菌基因组DNA，跑了0.8%的琼脂糖电泳，看不到清晰条带，严重的涂带和拖带现象？是DNA降解了吗？怎么处理？降解是操作导致还是样品本身的原因？ DNA提取过程当中有什么值得注意的操作步骤？ [ Last edited by bomeijuan on 2008-4-5 at 22:51 ] |
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用试剂盒提取，居然没带？ 这个月我做了4次用液氮研磨米曲霉提取基因组DNA，采用SDS-TE 60℃水浴30min（此步要反复颠倒混匀数次），饱和酚：氯仿（1：1）抽提一次（要提前2h配制），饱和酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）抽提两次，2倍冷无水乙醇沉淀20min（请问无水乙醇跟抽提的上清夜是否会均匀混合，感觉加了无水乙醇，处于分层状态，此现象是否正常？加完后没见有絮状白色沉淀出现，但20min后离心有白色沉淀），后用1ml，70％乙醇重漩沉淀，（沉淀很结实，必须用枪头搅，白色沉淀才能分散开，觉得不像是DNA），50℃烘箱干燥后，用加了RNAse 的TE 20ul溶解，37℃放置20min。跑电泳后，居然只有条很小KB的条带，不见基因组DNA。前两个月提过一次，成功了。这月不知为啥怎么提，都提不成，请大家帮忙找下原因，谢谢！ |
2楼2008-04-05 21:13:42
3楼2008-04-05 23:17:55
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4楼2008-04-06 13:31:00
