| 查看: 1056 | 回复: 3 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
测定PTP1B 的活性，底物是PTP1B，但是一直没有吸收
|
||
|
自己是药化专业的，最近想测自己合成的化合物对PTP1B 的抑制活性，用的是酶标法。 从sigma买来了PTP1B， 底物PNPP 因为不是那么稳定， 所以也是在sigma上买了配好的溶液。 PTP1B 储存液的pH 是7.2 hepes 缓冲液， 根据文献，所以我选择了PH 7.0 的mops工作液。 sigma给的PNPP 的说明书上说，溶液的PH是8.80~9.20，使用方法，是用200ul的溶液。我也照着用了。 最后反应体系是400ul。但是按照文献做了，也试了和文献接近的几个蛋白梯度，在405nm的吸光度还是非常低。感觉像是底物没有分解。 求助： 是因为我的PNPP 溶液的PH 太高？ 那如果买来PNPP 片，按照说明也还是需要配成碱性溶液，那我该怎么配？还是说直接用工作液把它溶解了？ 如果不是底物的问题，是不是我的蛋白浓度太低了？ 那篇文献说了试验中最终的蛋白浓度是5ng/100ul，但是买蛋白的时候包装都是20ug 和50ug的，所以我在怀疑是不是文献里的蛋白浓度写错了？ 初生牛犊，问的问题可能有些无知，还望大神指导！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
投稿精细化工
已经有6人回复
-
博士读完未来一定会好吗
已经有36人回复
-
之前让一硕士生水了7个发明专利，现在这7个获批发明专利的维护费可从哪儿支出哈？
已经有10人回复
-
导师想让我从独立一作变成了共一第一
已经有10人回复
-
博士申请都是内定的吗？
已经有9人回复
-
心脉受损
已经有8人回复
-
读博
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
有哪位大侠知道新型NKTR-214的结构么？查了一下没查到
已经有4人回复- 谁知道PTP1B的三维结构怎么查
已经有6人回复
3楼2018-04-20 15:12:05
wangmiao8674
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 292.1
- 帖子: 20
- 在线: 20小时
- 虫号: 3191797
- 注册: 2014-05-08
- 性别: MM
- 专业: 生物化工与食品化工
2楼2015-12-21 13:51:08
很是纠结==
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 71.5
- 散金: 139
- 帖子: 139
- 在线: 34.1小时
- 虫号: 3329657
- 注册: 2014-07-18
- 性别: MM
- 专业: 色谱分析
4楼2018-07-26 21:44:30