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测定PTP1B 的活性，底物是PTP1B，但是一直没有吸收
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自己是药化专业的，最近想测自己合成的化合物对PTP1B 的抑制活性，用的是酶标法。 从sigma买来了PTP1B， 底物PNPP 因为不是那么稳定， 所以也是在sigma上买了配好的溶液。 PTP1B 储存液的pH 是7.2 hepes 缓冲液， 根据文献，所以我选择了PH 7.0 的mops工作液。 sigma给的PNPP 的说明书上说，溶液的PH是8.80~9.20，使用方法，是用200ul的溶液。我也照着用了。 最后反应体系是400ul。但是按照文献做了，也试了和文献接近的几个蛋白梯度，在405nm的吸光度还是非常低。感觉像是底物没有分解。 求助： 是因为我的PNPP 溶液的PH 太高？ 那如果买来PNPP 片，按照说明也还是需要配成碱性溶液，那我该怎么配？还是说直接用工作液把它溶解了？ 如果不是底物的问题，是不是我的蛋白浓度太低了？ 那篇文献说了试验中最终的蛋白浓度是5ng/100ul，但是买蛋白的时候包装都是20ug 和50ug的，所以我在怀疑是不是文献里的蛋白浓度写错了？ 初生牛犊，问的问题可能有些无知，还望大神指导！！ |
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很是纠结==
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