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joker1

银虫 (小有名气)

[求助] 想用Red重组技术做基因敲除,但细菌多重耐药(包括氨苄青霉素抗性)该怎么办? 已有1人参与

想用Red重组技术做大肠杆菌基因敲除,但大肠杆菌多重耐药(包括氨苄青霉素抗性)与很多重组质粒自身的筛选标记一样,就无法进行筛选工作,这种情况该怎么办?
      想弄明白的问题如下:
1、同源重组辅助性质粒如,pKD46只有氨苄青霉素抗性这一种筛选标记吗?
2、如今市面上能买到具有其他筛选标记(除开氨苄青霉素抗性和TET)的同源重组辅助性质粒吗?
3、对于这种本身具有多种抗生素耐药性的细菌,做基因敲除有什么好的建议?
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心不开,话不来。
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-07-20 12:27:47
joker1: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-07-20 20:55:44
1.空载pKD46只有Amp抗性,可以自己通过MCS添加抗性。
2.可以向公司咨询,甚至可以掏钱让公司改造出你想要的筛选标记的质粒。
3.如果抗性筛选实在不行可以考虑营养缺陷型筛选,不过这类筛选一般假阳性不低。
大家相互帮助哈
2楼2014-07-20 01:10:08
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