应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 其他分析 » 测定鱼肉中组织蛋白酶B、B+L的酶活，为何后者会比前者小？
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 973  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jingmaoluhan

新虫 (初入文坛)

[求助] 测定鱼肉中组织蛋白酶B、B+L的酶活，为何后者会比前者小？

如题，我的测定方法如下：1g肉糜加入到冰冷的10ml粗酶提取液中,低温下均质一分钟，将混合物离心1000g-45min-4℃，过滤得到上清液。测定蛋白含量。0.5ml粗酶液（50mm乙酸钠缓冲液，PH=5.0， 1mmEDTA， 0.2%v/v Triton X-100）与1.25ml反应缓冲液（B, B+L：200mm磷酸钠缓冲液，2mmEDTA，0.05%（w/v）CHAPS， 4mmDTT, pH=6.0；H：200mm磷酸钠缓冲液，2mmEDTA，0.05%（w/v）CHAPS， 4mmDTT, pH=6.6）反应2min，40℃，之后加入0.5ml 20um底物溶液（B底物: Z-Arg-Arg-7-amido-4-methylcoumarin hydrochloride；B+L底物: Z-Phe-Arg-7-amido-4-methylcoumarin hydrochloride；H底物: L-arginine-7-amido-4-methylcoumarin hydrochloride
），反应时间为10min， 之后加入2ml终止液（100mm氯乙酸钠，70mm乙酸，30mm乙酸钠，PH=4.3）终止反应。采用荧光分光光度计测定，发射波长为510（460）nm，激发波长为350nm。酶活单位U ，One unit (U) of enzyme activity was defined as the amount of enzyme that hydrolyses the substrate and releases 1 um AMC per min at 30 ℃. Cathepsins activities were expressed as U/mg of protein.
标准曲线用不同浓度的7-amino-4-methylcoumarin (AMC 7-氨基-4甲基香豆素)溶于终止液中制作。将AMC溶于1ml粗酶提取液+2.5ml反应缓冲液+0.5ml水+4ml终止液 中，制成不同浓度的溶液
但是结果不是很稳定，有时候组织蛋白酶B酶活大于B+L的酶活，有时会小于（小于是正常的），这是为什么？请问有人遇到过类似方面的问题吗？跪谢！！！
回复此楼

» 本帖@通知

@亮亮xmlgxy @changle9139 @lifucheng @liwentao2010 @鸭绿江畔 @wyy080214

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-17 23:24:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

心若止水i

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by or鸢尾 at 2015-06-10 16:29:15
楼主，您好，对于您的问题不好意思我也不会，单能否请教您个问题，我是用荧光光度计测定酶，已绘制标准曲线（浓度-荧光强度），如何转换成酶活？感谢啊！！！！！等您回复...

您好，请问您最后是怎么做的呢？另外想问一下，我把处理好的鱼肉放到-80冰箱里，取出来之后进行处理提取粗酶液，怎么解冻呢。谢谢啦
赞一下 回复此楼
5楼2022-05-08 10:31:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

jingmaoluhan

新虫 (初入文坛)
大神快快现身吧！
回复此楼
2楼2014-07-18 09:44:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

or鸢尾

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jingmaoluhan at 2014-07-18 09:44:21
大神快快现身吧！

楼主，您好，对于您的问题不好意思我也不会，单能否请教您个问题，我是用荧光光度计测定酶，已绘制标准曲线（浓度-荧光强度），如何转换成酶活？感谢啊！！！！！等您回复
赞一下 回复此楼
4楼2015-06-10 16:29:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

心若止水i

新虫 (小有名气)
请问您找到原因了吗？我用您的方法可以不~
赞一下 回复此楼
6楼2022-05-08 10:34:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 药学求调剂 +9 喽哈加油 2026-04-14 11/550 2026-04-14 18:38 by lbsjt
[考研] 化工学硕294分，求导师收留 +32 yzyzx 2026-04-12 36/1800 2026-04-14 17:45 by lhj2009
[考研] 297工科调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-13 13/650 2026-04-14 16:46 by Art1977
[考研] 366求调剂 +11 不知名的小卅 2026-04-11 11/550 2026-04-14 15:50 by zs92450
[考研] 考研求调剂 +6 ban班小七 2026-04-11 6/300 2026-04-14 14:06 by 哆啦A梦只是个梦
[考研] 求调剂 +3 我爱高数高数爱� 2026-04-12 3/150 2026-04-14 01:00 by 王珺璞
[考研] 一志愿华南理工大学331分材料求调剂 +10 天下ww 2026-04-09 11/550 2026-04-13 23:25 by pies112
[考研] 生物学调剂 +11 小冉要努力 2026-04-10 13/650 2026-04-13 11:46 by 电化学及催化
[考研] 一志愿华中农微生物，288分，三年实验经历 +11 代fish 2026-04-09 11/550 2026-04-12 10:21 by Hayaay
[考研] 326求调剂 +6 Shansyn 2026-04-10 6/300 2026-04-12 09:46 by hammer3
[考研] 307求调剂 +10 tzq94092 2026-04-10 10/500 2026-04-12 08:18 by wise999
[考研] 22408调剂315分 +3 zhuangyan123 2026-04-09 3/150 2026-04-12 00:25 by 蓝云思雨
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 275求调剂 +9 1624447980 2026-04-08 10/500 2026-04-11 10:20 by Delta2012
[考研] 农业管理302分求调剂 +3 xuening1 2026-04-10 3/150 2026-04-11 10:18 by zhq0425
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 一志愿中科大070300化学，314分求调剂 +12 wakeluofu 2026-04-09 12/600 2026-04-10 09:57 by liuhuiying09
[考研] 调剂 +19 2261744733 2026-04-08 19/950 2026-04-09 19:11 by vgtyfty
[考研] 材料专硕初试分332一志愿西北工业大学， +12 故人?? 2026-04-09 12/600 2026-04-09 18:34 by Ccclqqq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭