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wht1211

木虫 (正式写手)

[交流] 大家帮忙分析一下我的Touchdown

小弟做用通用引物做扩增,引物的温度分别是55和53,由于我在50度退火条件下普通PCR有非特异性扩增,所以改做梯度PCR,退火温度从52到46每次下降1度,本以为结果能好一些,但没想到扩出来一条带也没有!但marker是正常的.大家有过这种情况吗?很纳闷为什么梯度PCR会一条带也没有呢?
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ypan

木虫 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
Touchdown PCR的最高温度不是从52度开始,而通常是比引物的估计温度大约高10都开始,低5度左右结束!
按照你的实验结果,可以从65度开始降落,然后50度最后一个温度!每降低一个温度一个循环,最后一个温度的循环数是总循环数减去已经的循环数!
祝你好运!
2楼2008-04-03 11:42:02
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