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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)

[交流] 请高手指导基因敲除

最近一直在做几个酵母菌株的基因敲除,可是始终做不出来,也不知道怎么回事,请有经验的高手给指点指点,
protocol如下:
酵母OD600=0.6~0.8
TE/LiAC 静止抚育40Min
PEG liAC 鲑精加DNA片段培养40分钟
heat shock 20min
然后离心涂板,请大家指点一下,这里面有什么地方是需要注意的,谢谢了,请大家帮帮忙,老板已经开始不高兴了
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):积极交流奖
当然是没有转化子呀?
那你的筛选培养基没问题吧,酵母转化比较成熟,你可以参考酵母遗传学方法实验指南,我也是几年前作过酵母,后来不做了
4楼2008-04-04 17:43:26
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

reasonspare(金币+0,VIP+0):搂主还有问题,你在费心一下.
老板不高兴,后果很严重阿.呵呵
你的做不出来是没有转化子还是?你的酵母属于营养缺陷型还是?你这些背景不说清楚,大家很难帮你的阿
2楼2008-04-02 16:54:28
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)

不好意思,现在才回楼上的,当然是没有转化子呀,不知道为什么,转质粒的时候就好好的,酵母用的是营养缺陷性,还有一个是G418筛选的,我原本以为是同源序列太少,才不行,可是增加到50bp同源了还是不行,大家帮着看看,问题出在哪?还有就是通常大家做酵母基因敲出用的都是哪种转化方法,谢谢了
3楼2008-04-02 19:56:46
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