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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请高手指导基因敲除
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)

[交流] 请高手指导基因敲除

最近一直在做几个酵母菌株的基因敲除，可是始终做不出来，也不知道怎么回事，请有经验的高手给指点指点，
protocol如下：
酵母OD600=0.6~0.8
TE/LiAC 静止抚育40Min
PEG liAC 鲑精加DNA片段培养40分钟
heat shock 20min
然后离心涂板，请大家指点一下，这里面有什么地方是需要注意的，谢谢了，请大家帮帮忙，老板已经开始不高兴了
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1楼 2008-04-02 08:10:04
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):积极交流奖
当然是没有转化子呀?
那你的筛选培养基没问题吧,酵母转化比较成熟,你可以参考酵母遗传学方法实验指南,我也是几年前作过酵母,后来不做了
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4楼2008-04-04 17:43:26
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
reasonspare(金币+0,VIP+0):搂主还有问题,你在费心一下.
老板不高兴,后果很严重阿.呵呵
你的做不出来是没有转化子还是?你的酵母属于营养缺陷型还是?你这些背景不说清楚,大家很难帮你的阿
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2楼2008-04-02 16:54:28
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)
不好意思，现在才回楼上的，当然是没有转化子呀，不知道为什么，转质粒的时候就好好的，酵母用的是营养缺陷性，还有一个是G418筛选的，我原本以为是同源序列太少，才不行，可是增加到50bp同源了还是不行，大家帮着看看，问题出在哪？还有就是通常大家做酵母基因敲出用的都是哪种转化方法，谢谢了
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3楼2008-04-02 19:56:46
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