24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 300  |  回复: 3
当前主题已经存档。

yaoyaochong

银虫 (正式写手)

[交流] 请高手指导基因敲除

最近一直在做几个酵母菌株的基因敲除,可是始终做不出来,也不知道怎么回事,请有经验的高手给指点指点,
protocol如下:
酵母OD600=0.6~0.8
TE/LiAC 静止抚育40Min
PEG liAC 鲑精加DNA片段培养40分钟
heat shock 20min
然后离心涂板,请大家指点一下,这里面有什么地方是需要注意的,谢谢了,请大家帮帮忙,老板已经开始不高兴了
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

reasonspare(金币+0,VIP+0):搂主还有问题,你在费心一下.
老板不高兴,后果很严重阿.呵呵
你的做不出来是没有转化子还是?你的酵母属于营养缺陷型还是?你这些背景不说清楚,大家很难帮你的阿
2楼2008-04-02 16:54:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yaoyaochong

银虫 (正式写手)

不好意思,现在才回楼上的,当然是没有转化子呀,不知道为什么,转质粒的时候就好好的,酵母用的是营养缺陷性,还有一个是G418筛选的,我原本以为是同源序列太少,才不行,可是增加到50bp同源了还是不行,大家帮着看看,问题出在哪?还有就是通常大家做酵母基因敲出用的都是哪种转化方法,谢谢了
3楼2008-04-02 19:56:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):积极交流奖
当然是没有转化子呀?
那你的筛选培养基没问题吧,酵母转化比较成熟,你可以参考酵母遗传学方法实验指南,我也是几年前作过酵母,后来不做了
4楼2008-04-04 17:43:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yaoyaochong 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297求调剂 +11 田洪有 2026-03-26 11/550 2026-03-29 13:14 by peike
[考研] 085701求调剂初试286分 +4 secret0328 2026-03-28 4/200 2026-03-28 21:09 by 15366876211
[考研] 求调剂 +7 争取九点睡 2026-03-28 8/400 2026-03-28 21:07 by 争取九点睡
[考研] 299求调剂 +7 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 7/350 2026-03-28 13:09 by 唐沐儿
[考研] 283求调剂 +7 A child 2026-03-28 7/350 2026-03-28 12:05 by zllcz
[考研] 张芳铭-中国农业大学-环境工程专硕-298 +4 手机用户 2026-03-26 4/200 2026-03-28 07:17 by mmm just
[考研] 086000调剂 +3 7901117076 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:34 by Jianing_Mi
[考研] 一志愿上海理工能源动力(085800)310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 266求调剂 +11 阳阳哇塞 2026-03-27 12/600 2026-03-27 17:56 by yu221
[考研] 材料292调剂 +12 橘颂思美人 2026-03-23 12/600 2026-03-27 15:44 by caszguilin
[考研] 085600,材料与化工321分,求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 化学308分求调剂 +8 你好明天你好 2026-03-23 9/450 2026-03-27 14:01 by 杨光于青云
[考研] 348求调剂 +4 小懒虫不懒了 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:47 by 果果妈咪
[考研] 材料调剂 +8 匹克i 2026-03-23 8/400 2026-03-27 08:11 by hypershenger
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料,材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-26 6/300 2026-03-26 18:03 by 邱gl
[考研] 机械学硕310分,数一英一,一志愿211本科双非找调剂信息 +3 @357 2026-03-25 3/150 2026-03-26 16:34 by by.MENG
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] B区考研调剂 +4 yqdszhdap- 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:51 by baoball
信息提示
请填处理意见