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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 如何确定外源基因产生的蛋白在细菌E.coli体内是否内存在活性（in vivo）?
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zls6110
11楼2014-07-11 20:47:18
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yehong0905
12楼2014-07-11 20:53:30
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+5, 鼓励回帖交流 2014-07-13 19:13:11
内容已删除
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13楼2014-07-12 01:06:05
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

13楼的回答兼有细胞内研究和细胞外研究，细胞内研究之前一般应该先做或者同时做细胞外研究。
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14楼2014-07-12 01:08:32
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studentg

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 867575969 at 2014-07-11 11:17:25
给lz提供一个思路，既然该蛋白与某代谢相关，添加外源物质或者改变外界因素，看代谢途径是否有所变化（与先前途径比较），不知道这个方法怎样，毕竟也没做过，希望可以帮助lz！

也是这么想的，想问问大家有没有研究的经验。
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道法自然，探其精妙。
15楼2014-07-12 04:48:07
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studentg

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by kuailechongb at 2014-07-11 12:54:48
直接向微生物培养基中添加底物看有没有转化也行啊，不过也得做一个空白对照，这样不一定要纯化蛋白后才能进行酶活检测。

谢谢，也可以这么试一试。
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道法自然，探其精妙。
16楼2014-07-12 04:49:24
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ljjj
17楼2014-07-12 04:57:01
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动力泉

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
studentg(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-13 19:13:27
引用回帖:
16楼: Originally posted by studentg at 2014-07-12 04:49:24
谢谢，也可以这么试一试。...

这个方法是行不通的，除非加上一些特定原核信号肽。由于原核表达一般除去了信号肽，表达的蛋白无法进行跨膜分泌，这也是后续蛋白纯化前要超声破碎的原因

[ 发自小木虫客户端 ]
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好好学习
18楼2014-07-12 08:09:55
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aabuzhangjun

新虫 (知名作家)
祝福，祈福，愿楼主今后一切顺利，愿自己及女朋友工作顺利，祈福！
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19楼2014-07-12 08:19:48
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myyounger

至尊木虫 (文坛精英)
路过顺便顶一下 祝楼主一切顺利！
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20楼2014-07-12 09:01:40
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