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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 如何确定外源基因产生的蛋白在细菌E.coli体内是否内存在活性（in vivo）?
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studentg

金虫 (小有名气)

[求助] 如何确定外源基因产生的蛋白在细菌E.coli体内是否内存在活性（in vivo）? 已有7人参与

我现在研究某代谢相关的基因，想请教各位一个问题。 除了利用E.coli表达后纯化得到蛋白再进行活性测定和产物分析外，有没有其他的方法可以确定表达出的蛋白在E.coli细胞中就存在活性？不知道问题是否说清楚了，还望各位不吝赐教。
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道法自然，探其精妙。
1楼 2014-07-11 17:23:02
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动力泉

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
studentg(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-13 19:13:27
引用回帖:
16楼: Originally posted by studentg at 2014-07-12 04:49:24
谢谢，也可以这么试一试。...

这个方法是行不通的，除非加上一些特定原核信号肽。由于原核表达一般除去了信号肽，表达的蛋白无法进行跨膜分泌，这也是后续蛋白纯化前要超声破碎的原因

[ 发自小木虫客户端 ]
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好好学习
18楼2014-07-12 08:09:55
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查看全部 34 个回答

pzx1004
★
studentg(金币+1): 谢谢参与
祝福

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-07-11 17:28:54
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece
★ ★ ★
studentg(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-11 18:19:46
给lz提供一个思路，既然该蛋白与某代谢相关，添加外源物质或者改变外界因素，看代谢途径是否有所变化（与先前途径比较），不知道这个方法怎样，毕竟也没做过，希望可以帮助lz！
赞一下 回复此楼
有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
7楼2014-07-11 18:17:25
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867575969

至尊木虫 (著名写手)
西门吹雪170: 屏蔽内容, 重复 2014-07-15 18:56:52
本帖内容被屏蔽
8楼2014-07-11 18:18:03
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查看全部 34 个回答
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