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wangdandelia

木虫 (正式写手)

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[求助] 硝酸银染色

大家好！请问有做PAGE胶电泳后的硝酸银染色的同学吗？我最近开始做脂多糖的鉴定，都没有褐色条带，参照物的标准脂多糖只是呈现阿辛兰的颜色，而我的样品什么颜色都没有。。。
我的步骤是：
1 将胶浸入200 ml 含有 0.005%阿辛兰染料，溶剂含有50%去离子水, 45% EtOH, 5% CH3COOH，振动30rpm，过夜；
2 用含有30%乙醇的 100 mL水溶液洗涤10min,然后100mL水洗5min;
3 200 mL 高碘酸钠浸泡5min;
4 100mL去超纯水水浸泡，洗涤两次，各自5min;
5 硝酸银染料浸泡30min（振荡40rpm），我是用黑色袋子包裹，放在摇床上面摇动。配方是AgNO3 2 g/L (280 mg in 140 water), 1.5 mL NaOH 5M, 然后加入氨水直到沉淀消失；这步我是加了300mL;
6 连续用水洗涤两次；
7 含有甲醛的柠檬酸钠溶液做为显色液，100 mL超纯水, 50 μL 甲醛（37%浓度，放在冰箱里，距离上一次使用的时间超过两年了）, 50 μL citrate de sodium 10%。（这个步骤我配了400mL，在显色的过程中不断换新的溶液确保胶的背景干净。
8 直到有条带出现加入固定液：50% eau ultrapure, 45% EtOH, 5% CH3COOH

请问我的步骤有问题吗？大家有什么好的建议吗？实验卡在这里好着急啊！多谢了！！！

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1楼2014-07-11 02:43:00

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