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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教 聚丙烯酰胺电泳
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叶子1983

铜虫 (小有名气)

[交流] 请教 聚丙烯酰胺电泳

想请教一下高手：
我做DNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴芬兰带总是跑不动是什么原因？
会不会DNA已经跑出去了呢？
我在60v电压下跑20h溴芬兰带只泳动大约2cm，银染也看不到条带？
胶浓度调小好像也没有用，主要是电流太小，
缓冲溶液新配的一开时电流还好，但跑几个小时就变得很小（几MA）？
请大家帮帮忙吧！！！
谢谢谢谢！！！
[search]聚丙烯酰胺电泳[/search]
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1楼 2008-04-01 09:33:20
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lhw718

金虫 (小有名气)
★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):xie
你没有及时加缓冲液，或者缓冲液太少了，没有形成回路！多加点缓冲液，把电压调高一些
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2楼2008-04-01 10:06:22
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叶子1983

铜虫 (小有名气)
缓冲液我都加满了啊，因为要跑20h，一般在晚上跑，没人看啊跑胶过程中可以加吗？
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3楼2008-04-01 10:10:29
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)
干嘛使那么小的电压啊？
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4楼2008-04-01 19:39:58
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dreamsail

银虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
我以前也遇到类似的问题,那时候我犯了个很傻的错误,封口的琼脂糖是用蒸馏水溶解的,结果电流很小.LZ的问题好象和我的不一样,不过一样能从小地方找找原因.
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5楼2008-04-01 22:15:13
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叶子1983

铜虫 (小有名气)
谢谢各位哦！
我做的聚丙烯酰胺没用琼脂糖，蒸馏水溶解是什么意思呢？
做DNA电泳电压好像不能太高，太高条带会不整齐，另外，高电压也没用，电流上不去，调到120，电压也只有十几！？？？、
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6楼2008-04-02 12:11:51
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dreamsail

银虫 (正式写手)
我的意思就是说不导电了.
别人用和你一样的方法跑的效果怎么样?
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7楼2008-04-02 16:00:21
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叶子1983

铜虫 (小有名气)
没人做过了这个了，以前一个师姐说她做的胶的浓度很小很小，当时溴芬兰是可以跑得，不过我的DNA和他的不一样，需要用高浓度的胶，今天电压加到120v了，新换了缓冲溶液，电流也只有18ma，这还是好的，估计再泡几个小时就只有几MA了！！！！/
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8楼2008-04-02 16:29:24
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walking_alone

你用的是什么DNA样品？PAGE的胶浓度是多少？120V，18mA的电流不算小了
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9楼2008-04-02 16:42:16
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walking_alone

另外，配胶的缓冲液是什么？跑胶的缓冲液是什么？为什么要跑过夜？我做的银染跑胶一般也就1.5h的样子
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10楼2008-04-02 16:44:52
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