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叶子1983

铜虫 (小有名气)

[交流] 请教 聚丙烯酰胺电泳

想请教一下高手:
我做DNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳,溴芬兰带总是跑不动是什么原因?
会不会DNA已经跑出去了呢?
我在60v电压下跑20h溴芬兰带只泳动大约2cm,银染也看不到条带?
胶浓度调小好像也没有用,主要是电流太小,
缓冲溶液新配的一开时电流还好,但跑几个小时就变得很小(几MA)?
请大家帮帮忙吧!!!
谢谢谢谢!!!
[search]聚丙烯酰胺电泳[/search]
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lhw718

金虫 (小有名气)

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):xie
你没有及时加缓冲液,或者缓冲液太少了,没有形成回路!多加点缓冲液,把电压调高一些
2楼2008-04-01 10:06:22
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叶子1983

铜虫 (小有名气)

缓冲液我都加满了啊,因为要跑20h,一般在晚上跑,没人看啊跑胶过程中可以加吗?
3楼2008-04-01 10:10:29
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)

干嘛使那么小的电压啊?
4楼2008-04-01 19:39:58
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dreamsail

银虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
我以前也遇到类似的问题,那时候我犯了个很傻的错误,封口的琼脂糖是用蒸馏水溶解的,结果电流很小.LZ的问题好象和我的不一样,不过一样能从小地方找找原因.
5楼2008-04-01 22:15:13
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叶子1983

铜虫 (小有名气)

谢谢各位哦!
我做的聚丙烯酰胺没用琼脂糖,蒸馏水溶解是什么意思呢?
做DNA电泳电压好像不能太高,太高条带会不整齐,另外,高电压也没用,电流上不去,调到120,电压也只有十几!???、
6楼2008-04-02 12:11:51
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dreamsail

银虫 (正式写手)

我的意思就是说不导电了.
别人用和你一样的方法跑的效果怎么样?
7楼2008-04-02 16:00:21
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叶子1983

铜虫 (小有名气)

没人做过了这个了,以前一个师姐说她做的胶的浓度很小很小,当时溴芬兰是可以跑得,不过我的DNA和他的不一样,需要用高浓度的胶,今天电压加到120v了,新换了缓冲溶液,电流也只有18ma,这还是好的,估计再泡几个小时就只有几MA了!!!!/
8楼2008-04-02 16:29:24
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walking_alone

你用的是什么DNA样品?PAGE的胶浓度是多少?120V,18mA的电流不算小了
9楼2008-04-02 16:42:16
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walking_alone

另外,配胶的缓冲液是什么?跑胶的缓冲液是什么?为什么要跑过夜?我做的银染跑胶一般也就1.5h的样子
10楼2008-04-02 16:44:52
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