24小时热门版块排行榜    

查看: 3292  |  回复: 23

lierhan

铁虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-16 15:49:51
一步法法克隆看起来貌似很方便呢,我最近目的基因连表达载体也总是连接不上,不知道可不可以试试这种方法。感觉大家说很对,单酶切载体的话最好去磷酸化,防止载体自连;双酶切载体的化就不需要了,保证酶切完全就行了。
21楼2014-07-10 20:22:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dizang2

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by zhaoxiaopang at 2014-07-09 20:53:05
用我设计的引物P目的片段能P出来,然后转化后长出来的点在菌落PCR用的还是同样的引物,就是P不出来...

像这么长的片段不知你怎么设计的鉴定的引物,可以在中间设计引物,太长的话不好P ,另外P 长的片段需要提高镁离子的浓度!
22楼2014-07-16 16:42:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虚心竹

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你用的是哪个公司的一步法试剂盒,我最近也在做,用的是ECORI 单酶
切,做了一次,没做出来,不知道这试剂盒效率到底高不高
23楼2014-12-23 22:50:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by zhaoxiaopang at 2014-07-09 20:13:40
载体单酶切37度过夜,胶回收。片段P出来也是单一条带再胶回收。然后就在连接体系是20UL,用的是一步克隆的试剂盒,连接半小时直接做转化。复苏后涂平板200Ul. 过夜长出来是满满一平板,挑单菌落做菌落PCR什么都P不 ...

你这个载体是是单酶切的,回收之后要去磷酸化,但是这样不好做
如果可以,你设计引物在载体上加上别的酶切位点A、B,设计片段两端也加上A、B。 这样,顺利的话,一周就做出来了。
24楼2014-12-24 11:08:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhaoxiaopang 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:47 by ColorlessPI
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南昌大学,327分,材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 323求调剂 +3 洼小桶 2026-03-18 3/150 2026-03-20 22:54 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 281求调剂(0805) +14 烟汐忆海 2026-03-16 25/1250 2026-03-20 15:47 by yuncha
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +9 手机用户 2026-03-17 9/450 2026-03-20 14:24 by 无懈可击111
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 085601专硕,总分342求调剂,地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
信息提示
请填处理意见