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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎样提高T-vector的转化效率阿？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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shielie

铁虫 (初入文坛)

[交流] 怎样提高T-vector的转化效率阿？

各位大虾：小妹想请教一个问题，我做的PCR产物想插入到T-vector(promega公司的）上去，产物长度1900bp,初步筛选用蓝白斑和青霉素抗性，挑选白斑作PCR电泳检测，所选的PCR引物是载体上自带的M13,但是不知道为什么，选的白斑都是假阳性，pcr检测后产物的长度都是300bp，不知道是什么原因
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1楼 2008-03-31 20:28:28
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yxdhd

铜虫 (小有名气)
T载体连接效率非常高,我用的是TAKARA公司的,基本上随便挑个3-4个菌就会有阳性,我都不用蓝白班筛选,阳性率太高了,你的PCR产物可能不纯,回收完后要电泳检验看是否回收到,是否是有杂带.另外PCR本身就存在假阳性的问题.
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13楼2008-04-03 19:12:06
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lliu

新虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
It was the problem of ligation insteal of transformation.


哈哈哈,是 instead of 吧

[ Last edited by reasonspare on 2008-4-4 at 03:55 ]
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2楼2008-04-01 03:23:46
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碧荷叶

铜虫 (初入文坛)
我也有同样的问题，有时连不上
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3楼2008-04-01 07:41:05
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shielie

铁虫 (初入文坛)

谢谢回复

谢谢各位,我决定将产物和载体的量比例提到到1:10
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4楼2008-04-01 09:39:15
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