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bainaling

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 请教用过XmnⅠ的童鞋们

最近在用XmnⅠ(平末端)尝试改造pKD46,将其抗性改为庆大霉素的。可是都弄了好久了,都没有成功,快要崩溃放弃掉了。请问大牛们
1、设计XmnⅠ的酶切位点的时候要注意什么呢?
2、还有是酶切PCR产物好,还是连到T载体上再酶切比较好呢?
3、酶切之后是不是必须要去磷酸化,如果用新鲜的直接连接可不可以呢?
伤感伤感啊。。。真是丢丢。。。
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