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请教用过XmnⅠ的童鞋们
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最近在用XmnⅠ（平末端）尝试改造pKD46，将其抗性改为庆大霉素的。可是都弄了好久了，都没有成功，快要崩溃放弃掉了。请问大牛们 1、设计XmnⅠ的酶切位点的时候要注意什么呢？ 2、还有是酶切PCR产物好，还是连到T载体上再酶切比较好呢？ 3、酶切之后是不是必须要去磷酸化，如果用新鲜的直接连接可不可以呢？ 伤感伤感啊。。。真是丢丢。。。 |
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