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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)

[求助] DNA提取 已有6人参与

求助各位大神，想知道各位用mobio土壤DNA提取试剂盒提取DNA时，DNA浓度是多少，我提出来的DNA浓度只有几纳克每微升，不知道问题出在哪儿，各位是怎么提的？
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1楼 2014-07-06 08:55:31
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爱骨头的鱼

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-06 12:24:33
我用的是美国OMEGA公司的土壤细菌DNA提取试剂盒，提取出来的DNA浓度高的有200多纳克，低的也几十纳克，至于你所说的试剂盒，我没有用过
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2楼2014-07-06 10:55:04
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永远一片天

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-08 14:56:36
悠悠飘杨: 金币+1, ★有帮助 2014-07-14 08:46:10
如果操作没有问题，是否是菌含量过低~实验中细节也很重要，稍微忽视，DNA浓度就会很低。。
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3楼2014-07-06 12:51:44
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张少存

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-08 14:56:47
细节 好多时候在液面分界处为DNA聚集处 要注意吸取到
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花开不败
4楼2014-07-06 16:53:28
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 永远一片天 at 2014-07-06 12:51:44
如果操作没有问题，是否是菌含量过低~实验中细节也很重要，稍微忽视，DNA浓度就会很低。。

有哪些细节要注意的，能跟我详细说说吗？
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5楼2014-07-07 08:50:10
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 张少存 at 2014-07-06 16:53:28
细节 好多时候在液面分界处为DNA聚集处 要注意吸取到

分界处是指空气液面分界处吗？
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6楼2014-07-07 08:54:44
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捐助贵宾 (正式写手)

科研技术服务，微生物研究

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-08 14:56:57
这个试剂盒专门提取土壤的，可以去除腐酸杂质等…有的样本提取里面本身的含量少，但能 p c r出来就行

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7楼2014-07-07 09:15:49
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永远一片天

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-08 14:57:11
引用回帖:
5楼: Originally posted by 悠悠飘杨 at 2014-07-07 08:50:10
有哪些细节要注意的，能跟我详细说说吗？...

比如你用试剂盒，最后一步用水溶解的时候，一定要滴在正中心，水滴到硅胶膜的周边，对DNA的回收浓度是有影响的。漂洗步骤时，漂洗次数多，虽然可以提高DNA的纯净度，但相应也会降低DNA浓度~等
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8楼2014-07-07 10:25:46
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swach

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 爱骨头的鱼 at 2014-07-06 10:55:04
我用的是美国OMEGA公司的土壤细菌DNA提取试剂盒，提取出来的DNA浓度高的有200多纳克，低的也几十纳克，至于你所说的试剂盒，我没有用过

你就是按照试剂盒的步骤来做的吗，我也用的是omega的土壤提取试剂盒，提出来的基因组只有十几纳克，而且纯度很低。请问你涡旋振荡一般多长时间？
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9楼2014-07-08 10:18:38
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爱骨头的鱼

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by swach at 2014-07-08 10:18:38
你就是按照试剂盒的步骤来做的吗，我也用的是omega的土壤提取试剂盒，提出来的基因组只有十几纳克，而且纯度很低。请问你涡旋振荡一般多长时间？...

是按照试剂盒的步骤提取的。涡旋振荡是按照说明书上的时间，5分钟。其中有一步挺重要的，第六步，就是要在-20放置1小时左右，这样会更有利于提取DNA。
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10楼2014-07-08 12:49:58
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