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thckaixin金虫 (小有名气)
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[求助]
关于组织匀浆 萃取 乳化问题 已有2人参与
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| 我最近在做组织匀浆标准曲线，用乙酸乙酯萃取时经常会发生乳化现象，想知道会不会影响回收率啊。。主要是我的实验重复性特别差，有时候萃取出来有时候又萃取不出来，不知道是什么原因，就想问问是不是乳化的问题。或者大家有没有做组织匀浆是有要特别注意的地方？？ |
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guangzhizi3
铜虫 (小有名气)
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2楼2014-07-02 16:02:40
【答案】应助回帖
★ ★ ★
thckaixin: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 谢谢。。。。 2014-07-11 11:09:06
thckaixin: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 谢谢。。。。 2014-07-11 11:09:06
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其实乙酸乙酯沉淀蛋白能力不强，如果是血浆倒还可以，你可以加酸碱处理后乙酸乙酯萃取，萃取出来的东西比较干净，上层乙酸乙酯，中层蛋白，下层水。但是你的是组织匀浆，建议你用甲醇乙腈吧，除非你的药物只溶于乙酸乙酯。乙酸乙酯乳化会导致你的检测线偏低，但是干净易于浓缩。你重复性查，你可以考虑如下几个问题：1.你在提取组织时，血液是否洗干净，水是否吸干；2.制备匀浆时你是否在冰浴中进行，如果是肝，里边的酶很多，会代谢药物，可以加入酶抑制剂；3.匀浆时间，提取时间是否充分而且统一；4.加入溶剂体积是否一致；5.光用乙酸乙酯可能不行；6.浓缩时你的药物是否稳定，是否会挥发；7.样品再组织中是否稳定。 我当时做的时候是称取一定量的肝脏或者其他组织，加速适当的4℃生理盐水，再加入适当药液，冰浴一起匀浆。再取匀浆提取药物检测，重复性还可以，符合要求。 |
3楼2014-07-11 10:41:10
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