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thckaixin

金虫 (小有名气)

[求助] 关于组织匀浆 萃取 乳化问题 已有2人参与

我最近在做组织匀浆标准曲线,用乙酸乙酯萃取时经常会发生乳化现象,想知道会不会影响回收率啊。。主要是我的实验重复性特别差,有时候萃取出来有时候又萃取不出来,不知道是什么原因,就想问问是不是乳化的问题。或者大家有没有做组织匀浆是有要特别注意的地方??
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guangzhizi3

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
thckaixin: 金币+2, 有帮助, 谢谢 2014-07-03 09:16:32
乳化好像是会影响提取回收率的~乳化时,即使离心后,也不能很好的将有机层与水层分开的,所以能取到的有机相不是很完全,回收率也就不稳定的了~我们印象中那会的做法是放到冰箱里或者是电吹风吹吹(具体是用什么方法忘记了)。提高样品的pH好像也会减少乳化现象的发生的~
2楼2014-07-02 16:02:40
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voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
thckaixin: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 谢谢。。。。 2014-07-11 11:09:06
其实乙酸乙酯沉淀蛋白能力不强,如果是血浆倒还可以,你可以加酸碱处理后乙酸乙酯萃取,萃取出来的东西比较干净,上层乙酸乙酯,中层蛋白,下层水。但是你的是组织匀浆,建议你用甲醇乙腈吧,除非你的药物只溶于乙酸乙酯。乙酸乙酯乳化会导致你的检测线偏低,但是干净易于浓缩。你重复性查,你可以考虑如下几个问题:1.你在提取组织时,血液是否洗干净,水是否吸干;2.制备匀浆时你是否在冰浴中进行,如果是肝,里边的酶很多,会代谢药物,可以加入酶抑制剂;3.匀浆时间,提取时间是否充分而且统一;4.加入溶剂体积是否一致;5.光用乙酸乙酯可能不行;6.浓缩时你的药物是否稳定,是否会挥发;7.样品再组织中是否稳定。
我当时做的时候是称取一定量的肝脏或者其他组织,加速适当的4℃生理盐水,再加入适当药液,冰浴一起匀浆。再取匀浆提取药物检测,重复性还可以,符合要求。
微信公众号:Pharmaguider(药事纵横),主页:www.pharmaguider.cn
3楼2014-07-11 10:41:10
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