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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 单酶切问题！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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dan0411039

银虫 (小有名气)

[交流] 单酶切问题！

体系20ul
10*buffer  2ul
EcoRI        1ul    (15U/ul)
λDNA        2.5ul(1ug)
ddH2O      14.5ul
37°酶切2小时

出现电泳图中的这种现象？
从左到右依次是1Kb,λDNA /HindIII,λDNA ,三管一样的样品
请虫友帮帮忙，我在本科毕业生论文，快答辩了急急急！

[ Last edited by dan0411039 on 2008-3-29 at 21:59 ]
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1楼 2008-03-29 21:43:45
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wwfifa

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心
可能是没有加去磷酸化酶（CIAP）吧,你再试试看吧
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2楼2008-03-29 22:41:47
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx, welcome
引用回帖:
Originally posted by wwfifa at 2008-3-29 15:41:
可能是没有加去磷酸化酶（CIAP）吧,你再试试看吧

酶切好象跟去磷酸化没关系吧?
我一般50微升体系,1微升内切酶,可能你加的有点多.
λDNA很好切,我们一般试验内切酶有没有活性,才切λDNA.另外你的电泳图片,是不是缓冲液有问题,也不是很清楚.建议换新的缓冲液重新跑一下电泳.

[ Last edited by 克隆大虾 on 2008-3-29 at 21:01 ]
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3楼2008-03-30 03:54:58
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jjeagle

新虫 (初入文坛)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):new one, two more
图中缺少无酶切的对照，怀疑原样品已坏
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4楼2008-03-30 04:20:05
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biogefart

木虫 (著名写手)
1.EcoRI有星号活力。
2.电泳缓冲液用的次数太多。
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闹太套
5楼2008-03-30 08:27:12
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dan0411039

银虫 (小有名气)

谢谢

谢谢，各位虫友的建议
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6楼2008-03-30 14:34:34
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
1、考虑你跑电泳的问题
2、酶切是否缩短时间
3、原DNA是否降解
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帮助虫友，提升自己
7楼2008-03-30 18:18:34
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tigerzh

铁杆木虫 (正式写手)
时间太长了好像
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wherethereisawill,thereisaway!
8楼2008-03-30 18:25:47
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