24小时热门版块排行榜    

查看: 158  |  回复: 7
当前主题已经存档。

dan0411039

银虫 (小有名气)

[交流] 单酶切问题!

体系20ul
10*buffer  2ul
EcoRI        1ul    (15U/ul)
λDNA        2.5ul(1ug)
ddH2O      14.5ul
37°酶切2小时

出现电泳图中的这种现象?
从左到右依次是1Kb,λDNA /HindIII,λDNA ,三管一样的样品
请虫友帮帮忙,我在本科毕业生论文,快答辩了急急急!

[ Last edited by dan0411039 on 2008-3-29 at 21:59 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwfifa

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心
可能是没有加去磷酸化酶(CIAP)吧,你再试试看吧
2楼2008-03-29 22:41:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx, welcome
引用回帖:
Originally posted by wwfifa at 2008-3-29 15:41:
可能是没有加去磷酸化酶(CIAP)吧,你再试试看吧

酶切好象跟去磷酸化没关系吧?
我一般50微升体系,1微升内切酶,可能你加的有点多.
λDNA很好切,我们一般试验内切酶有没有活性,才切λDNA.另外你的电泳图片,是不是缓冲液有问题,也不是很清楚.建议换新的缓冲液重新跑一下电泳.

[ Last edited by 克隆大虾 on 2008-3-29 at 21:01 ]
3楼2008-03-30 03:54:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jjeagle

新虫 (初入文坛)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):new one, two more
图中缺少无酶切的对照,怀疑原样品已坏
4楼2008-03-30 04:20:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biogefart

木虫 (著名写手)

1.EcoRI有星号活力。
2.电泳缓冲液用的次数太多。
闹太套
5楼2008-03-30 08:27:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dan0411039

银虫 (小有名气)

谢谢

谢谢,各位虫友的建议
6楼2008-03-30 14:34:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
1、考虑你跑电泳的问题
2、酶切是否缩短时间
3、原DNA是否降解
帮助虫友,提升自己
7楼2008-03-30 18:18:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tigerzh

铁杆木虫 (正式写手)

时间太长了好像
wherethereisawill,thereisaway!
8楼2008-03-30 18:25:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dan0411039 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见