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123q明

金虫 (小有名气)

[求助] 降胆固醇乳酸菌的筛选 已有1人参与

正己烷萃取的样品,需用氮气吹干仪挥干,但实验室没有此仪器,能否用其它方法代替?我想确定的是能否用60度烘箱烘干或用核酸蛋白浓缩仪代替(实验新手,求指导 )
测定胆固醇含量的步骤:(这是在一篇文章中摘抄的)
取样品1ml,加入 6 mL 95%乙醇,并加入 4 mL 50% KOH,漩涡混匀;加盖,60度水浴,10 min 后水浴冷却,加入 10mL 正己烷,漩涡振荡充分混匀,加入 6 mL 蒸馏水,漩涡混匀,室温放置 10 min,静置分层,小心吸取 8 mL 正己烷层(上层)转移到清洁试管中;于 60度下,小心通氮气流将正己烷蒸干,加入 4 mL 邻苯二甲醛 试剂,充分溶解胆固醇,放置 10 min,缓慢加入 2 mL  浓硫酸,立即漩涡振荡混匀,自然冷却,静置 10 min,在 10-90 min 内测定 OD550
问题:1.50%的KOH 和95%的乙醇是什么作用?
         2.正己烷的量可以减少吗?有的文献中4ml的样品加入3ml的正己烷,如果正己烷的量少的话,萃取的量也会受到影响吧?
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meng_qi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

小冀-: 应助指数+1 2017-02-28 08:31:35
1.二者的作用应该是是胆固醇皂化,以利于萃取
2.正己烷的量大些可以减小误差,因为样品中的胆固醇很少,萃取完之后分离正己烷肯定有损失,正己烷量越大,损失的胆固醇就越少
学习交流
2楼2017-02-27 18:50:36
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