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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 弱弱的问一下
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崔琳cll

木虫 (著名写手)

[求助] 弱弱的问一下 已有1人参与

本人不是学生物的，很多有关DNA的知识都不懂，我想问一下，2条DNA杂交的温度如何计算？
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1楼 2014-07-01 09:27:18
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
方法是：将两条单链DNA，按照若干摩尔比例混合，例如单链A=1摩尔，单链B=2摩尔（1：2），一般多做几个比例，在duplex buffer（一般是30 mM Hepes, pH 7.5, 100 mM Potassium Acetate)中混合好。然后在75-94度加热5min（可以在heatblock中进行），然后关闭heat block电源，让混合液冷却到室温；或者加热到75-94度后，放到37度水浴锅中，让其缓慢冷却，最后到室温。一般30min-60min即可。然后将杂交复合物load到native PAGE gel电泳，看哪个摩尔混合比例最合适-----也就是在PAGE胶上没有看到游离的单链DNA。
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-07-01 09:32:17
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崔琳cll

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-07-01 09:32:17
方法是：将两条单链DNA，按照若干摩尔比例混合，例如单链A=1摩尔，单链B=2摩尔（1：2），一般多做几个比例，在duplex buffer（一般是30 mM Hepes, pH 7.5, 100 mM Potassium Acetate)中混合好。然后在75-94度加热5m ...

请问有没有相关计算的软件？我想先看一下，设计的DNA是不是合适
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3楼2014-07-01 09:33:58
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崔琳cll

木虫 (著名写手)
为什么问个问题，就没有人能回答，真心不高兴
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4楼2014-07-01 11:09:58
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