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表里不一的

新虫 (初入文坛)

[求助] 在对目的基因进行干扰后,筛单克隆的时候,为何铺完板之后 长不了多久 细胞就都死了 已有2人参与

我在真核细胞里对目的基因进行下调,但是在晒单克隆的时候,铺完板之后 ,开始长得挺好,为什么 不几天就开始死,而且是全部死亡。多次尝试都没有改善  请问怎么回事?  比较急  谢谢
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55liuyan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
表里不一的: 金币+1, 有帮助, 谢谢 2014-06-30 15:12:52
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-30 21:01:33
表里不一的: 金币+1, 有帮助, 谢谢 2014-07-01 16:58:39
这种情况的话有可能是这个基因本身的问题,它可能对于细胞生长是必要的,换句话说那是致死突变;另一方面就是,可能是你的转染过程或者是细胞培养过程出了问题,因为就算你不转染,如果细胞的条件不好它也是会死掉的。
每日三省吾身,平静,定气
3楼2014-06-30 12:11:48
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表里不一的

新虫 (初入文坛)

谢谢了  细胞培养还是木有问题的
2楼2014-06-30 11:30:49
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表里不一的

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 55liuyan at 2014-06-30 12:11:48
这种情况的话有可能是这个基因本身的问题,它可能对于细胞生长是必要的,换句话说那是致死突变;另一方面就是,可能是你的转染过程或者是细胞培养过程出了问题,因为就算你不转染,如果细胞的条件不好它也是会死掉的 ...

我的多克隆细胞状态挺好的,我也考虑过是致死突变,但是我的对照组单克隆也是没有存活,也就是说不单单是基因的问题吧
4楼2014-06-30 15:12:25
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pypsak

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
表里不一的: 金币+1, 有帮助, 2014-07-01 16:59:08
单克隆本身的存活率比较低,我们这一般用96孔板的话,在10%左右,也有很多细胞更低,所以用了个cellplaza,存活率能达到50%。一般要挑单克隆的细胞,都会先用有限稀释法验证一下单克隆能否长起来。
5楼2014-07-01 08:52:16
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