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足下客

木虫 (正式写手)

[交流] 表达质粒载体与克隆质粒载体有什么区别?

我们实验室分离到了一株氧化葡萄糖酸杆菌,能够有效得提高某个催化反应。老师想让我提高一下,这株菌催化该反应的酶的表达量。因为大肠杆菌中没有这种酶的辅酶再生系统,所以要在氧化葡萄糖杆菌内部构建质粒,而现在关于这方面的文献很少。
    目前通用的几种质粒都不能在此菌中稳定存在,所以老师让我从此菌的内源性质粒入手,构建一种新的质粒。
    请问我要构建的这种质粒是不是属于表达质粒载体?这种质粒构建时与克隆载体的构建有什么区别吗?是不是难度会更大一些?
    我是一名新手,现在一点思路都没有,希望前辈们能多多指点。先谢过大家了
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

表达质粒载体与克隆质粒载体有什么区别:功能和部件不一样。
克隆载体:
(1)载体能够独立的复制;
(2)具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记。
表达质粒载体:
(1)载体能够独立的复制;
(2)具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记。且克隆位点应在启动子序列后, 以使克隆的外源基因得以表达;
(3)具有很强的Promoter,能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别;
(4)具有Repressor,使启动子受到控制,只有当诱导时才能进行转录;
(5)具有很强的终止子,以便使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因, 而不转录无关的基因。
(6)所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号,即起始密码AUG和SD序列, 以便转录后能顺利翻译。
2楼2008-03-28 14:19:19
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足下客

木虫 (正式写手)

谢谢楼上,基础的知识已经有所了解了。具体构建起来貌似还是难度很大
3楼2008-03-28 16:53:56
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annwt

木虫 (正式写手)

工作的第一是了解内源质粒的特性,寻找合适的酶切位点,与目的基因连接。
转化后的表达问题还有许多,看你的运气了。
如果工业化生产那就不是你的问题了,要看老板的战略思想是否对头了!
4楼2008-03-28 17:08:54
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足下客

木虫 (正式写手)

老板说先不要管表达效率的高低,只要能构建出能稳定存在于氧化葡萄糖杆菌中的多拷贝质粒就行。至于优化那是后期工作
可是现在关于这种菌内源性质粒的文献很少。而且这种内源性质粒是低拷贝的,要先把它变成高拷贝的才行
5楼2008-03-28 19:44:49
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王者之心

看看    新手路过
6楼2008-06-09 23:31:25
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