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CIK细胞对肿瘤细胞杀伤实验
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最近在做CIK细胞对肿瘤细胞杀伤实验,过程是:1,肿瘤细胞用1640养好后,用1640制成细胞悬液,铺板。 2, 4小时后弃去板内上清,把用无血清培养基培养成熟的CIK细胞按不同比例制成细胞悬液,加到96孔板中。同时设好不同细胞数的单独CIK细胞孔。培养48小时。 3,加MTT液,培养4小时。翻板弃上清,加DMSO,震荡,490nm测OD值。 而我的疑问是:1,铺肿瘤细胞,我用的是肿瘤细胞的培养基,4小时后加CIK细胞时,我是应该用CIK细胞的培养基还是肿瘤细胞的培养基呢?如果用CIK细胞的培养基,需要把孔内肿瘤细胞的培养基弃掉吗? 2,可以肿瘤细胞,CIK细胞一起铺板吗?如果可以,应该使用哪种培养基呢?3,加MTT液时,孔内有约200微升的培养基,直接加MTT液就可以吗?MTT液已配成5mg/mL,加MTT液不用考虑工作浓度吗?4,可以适当减少MTT作用时间吗?4小时对我来说,实验不太方便。 希望大家多多帮忙回答,谢谢~~~~ |
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