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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白浓缩，质谱
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 馒头爱生物 at 2014-06-23 15:42:52
蛋白浓缩用3k离心管就可以，时间有点长的话，注意加蛋白酶抑制剂防止降解。
打质谱的话银染考染都可以，不跑胶提供蛋白溶液也可以，但是要提供溶液的成分，方便别人判断应该帮你怎么处理蛋白，因为溶液里很多成分对 ...

第一天用抗原抗体亲和层析，纯化得到的浓度虽然不高，但是western-blot能检测到。接下来反复过柱子，大概一个星期，将得到的蛋白溶液透析浓缩，可是western竟然检测不到了。很奇怪，难道是蛋白浓度低且在4度放了一个星期，蛋白降解了。浓缩条件是聚乙二醇20000，透析是4度PBS,个人认为也不会有问题。除了蛋白裂解液中的蛋白酶抑制剂，纯化的一个星期中都没有补加，不知大家如何补加了，是否对我的降解也有影响，疑惑，求指点。
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11楼2014-06-25 21:42:17
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馒头爱生物

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xiaoyu0127 at 2014-06-25 20:45:19
您的意思是银染也可以做质谱？...

可以
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12楼2014-06-26 09:05:13
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
你不能制备多一些蛋白质？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
13楼2014-06-26 20:29:37
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-06-26 20:29:37
你不能制备多一些蛋白质？

是这样，我是用抗原抗体亲和层析，对抗体要求量很大，抗体购买的明显较少，所以我只能积少成多。

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14楼2014-06-27 11:14:31
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
14楼: Originally posted by xiaoyu0127 at 2014-06-27 11:14:31
是这样，我是用抗原抗体亲和层析，对抗体要求量很大，抗体购买的明显较少，所以我只能积少成多。
...

能不能用别的方法来纯化
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15楼2014-06-27 19:36:10
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lilihui

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

用低于蛋白分子量的超滤凝缩管浓缩，蛋白纯度大于90%，可以把蛋白液（100微升左右就可以）交给一些专门得公司去做，省时省力，而且比自己处理的要好。
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16楼2015-10-19 14:53:18
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