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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 馒头爱生物 at 2014-06-23 15:42:52
蛋白浓缩用3k离心管就可以,时间有点长的话,注意加蛋白酶抑制剂防止降解。
打质谱的话银染考染都可以,不跑胶提供蛋白溶液也可以,但是要提供溶液的成分,方便别人判断应该帮你怎么处理蛋白,因为溶液里很多成分对 ...

第一天用抗原抗体亲和层析,纯化得到的浓度虽然不高,但是western-blot能检测到。接下来反复过柱子,大概一个星期,将得到的蛋白溶液透析浓缩,可是western竟然检测不到了。很奇怪,难道是蛋白浓度低且在4度放了一个星期,蛋白降解了。浓缩条件是聚乙二醇20000,透析是4度PBS,个人认为也不会有问题。除了蛋白裂解液中的蛋白酶抑制剂,纯化的一个星期中都没有补加,不知大家如何补加了,是否对我的降解也有影响,疑惑,求指点。
11楼2014-06-25 21:42:17
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馒头爱生物

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by xiaoyu0127 at 2014-06-25 20:45:19
您的意思是银染也可以做质谱?...

可以
12楼2014-06-26 09:05:13
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

你不能制备多一些蛋白质?
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
13楼2014-06-26 20:29:37
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-06-26 20:29:37
你不能制备多一些蛋白质?

是这样,我是用抗原抗体亲和层析,对抗体要求量很大,抗体购买的明显较少,所以我只能积少成多。

[ 发自小木虫客户端 ]
14楼2014-06-27 11:14:31
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
14楼: Originally posted by xiaoyu0127 at 2014-06-27 11:14:31
是这样,我是用抗原抗体亲和层析,对抗体要求量很大,抗体购买的明显较少,所以我只能积少成多。
...

能不能用别的方法来纯化
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
15楼2014-06-27 19:36:10
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lilihui

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

用低于蛋白分子量的超滤凝缩管浓缩,蛋白纯度大于90%,可以把蛋白液(100微升左右就可以)交给一些专门得公司去做,省时省力,而且比自己处理的要好。
16楼2015-10-19 14:53:18
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