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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白浓缩，质谱
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白浓缩，质谱 已有3人参与

打算做某个蛋白的质谱。蛋白纯化后，浓度太低，western可以检测，可是无法考染或者银染看是否纯。请教，如何保持蛋白活性的前提下将目前约4ml的蛋白溶液浓缩至约100微升(用PEG20000已经初步浓缩)。另外，做质谱的话银染考染都可以吧，样品制备有什么要求。跪求大虾指点。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2014-06-22 14:41:32
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lilihui

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

用低于蛋白分子量的超滤凝缩管浓缩，蛋白纯度大于90%，可以把蛋白液（100微升左右就可以）交给一些专门得公司去做，省时省力，而且比自己处理的要好。
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16楼2015-10-19 14:53:18
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-06-23 08:24:38
用超滤的方法应该没问题，买个超滤管也就100快的样子
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爱拼才会赢
2楼2014-06-22 16:40:33
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by anyaxiong at 2014-06-22 16:40:33
用超滤的方法应该没问题，买个超滤管也就100快的样子

可以控制得到的量吗，一个管子针对同一种样品可以反复使用吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2014-06-23 10:22:05
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馒头爱生物

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白浓缩用3k离心管就可以，时间有点长的话，注意加蛋白酶抑制剂防止降解。
打质谱的话银染考染都可以，不跑胶提供蛋白溶液也可以，但是要提供溶液的成分，方便别人判断应该帮你怎么处理蛋白，因为溶液里很多成分对质谱有影响，要先处理再进行。
质谱的灵敏度特别高，无论做什么处理，请一定要带口罩和手套，有条件的话带帽子，否则你会在自己的质谱检测报告中看到很多keratin角蛋白的。
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4楼2014-06-23 15:42:52
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