应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR 扩增曲线求助
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
52/1返回列表
查看: 4589  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

[求助] 荧光定量PCR 扩增曲线求助 已有6人参与

诸位大侠我的试剂是使用SYBR.TAKARA的，机子是AB7300，但是做出来的扩增曲线不稳定啊。做的时候很多有时候做的还行，但是在有的时候扩增曲线出现在基线上面，有时候就是没有平台期，扩增曲线乱七八糟的。想问问这是什么原因呢？我从以下3方面入手解决。1.试剂 （开启后4°避光保存） 2。加样误差（已经很小心了） 3.仪器的稳定性（换了扩增的孔道）。事实上到现在都没查出来是什么原因。求教诸位大侠这究竟是怎么回事，问了其他实验室的师兄他们也不是很清楚。下面是我的图片。

荧光定量PCR 扩增曲线求助
IEF扩增曲线（58.5）.jpg


荧光定量PCR 扩增曲线求助-1
IEF标准曲线.jpg


荧光定量PCR 扩增曲线求助-2
平行1溶解曲线.jpg


荧光定量PCR 扩增曲线求助-3
扩增曲线3号平行.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
生命不息奋斗不止
1楼 2014-06-22 14:17:54
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冷雁孤旅: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2014-06-24 19:57:05
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励热心回帖交流 2014-06-25 13:30:41
这个和试剂及仪器的关系不是很大, 因为试剂和仪器都是很成熟的, 看熔解曲线的温度才70多℃, 可能是引物二聚体,你的目标片段应该没有被扩增出来, 如果是目标片段, 溶解曲线的温度应该在87℃左右. 你设计的片段有多大, 在RT-PCR之前应该做个普通PCR确定你设计的片段可用. 通过操作的时候把加样板放在冰上, 把RT-PCR的成分(模版除外)混合好 再分装到反应管中, 最后在加入模板, RT-PCR之前, 反应管(96/384孔板)短暂离心以混匀反应成分. 然后放入仪器PCR即可. 只要你设计的片段没问题, 一般不会有什么问题的. 我推测一下你这个实验的主要问题就在于没有目的片段, 你把片段设计在150-200 bp左右试试. 附上正确的熔解曲线图给你看看.
赞一下 回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : standarddissociationcurve.jpg
    • 2014-06-24 19:07:49, 88.61 K
16楼2014-06-24 19:07:59
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
帖子要沉下了 @西瓜  @biostar2009 @孙启亮 @cicelyzh
回复此楼
生命不息奋斗不止
2楼2014-06-22 16:29:14
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
版主在不在 @飞约疯人院 求分析
赞一下 回复此楼
生命不息奋斗不止
3楼2014-06-23 20:00:07
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冷雁孤旅: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-06-23 20:37:24
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-24 08:57:20
没有平台期：
1可能是模板，引物，镁离子，酶、dntps浓度有点高，建议优化下
2分析可能 模板太浓，稀释10倍100倍1000倍
3是否目的基因表达的水平较低,扩增起飞较晚还没达到平台期.
赞一下 回复此楼
人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
4楼2014-06-23 20:32:22
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂 +4 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 5/250 2026-03-27 09:43 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-26 10/500 2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 348求调剂 +3 小懒虫不懒了 2026-03-27 3/150 2026-03-27 04:30 by wxiongid
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +6 谷雨上岸 2026-03-23 7/350 2026-03-26 18:55 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂推荐 +4 清酒714 2026-03-26 5/250 2026-03-26 17:49 by fmesaito
[考研] 271求调剂 +6 生如夏花… 2026-03-22 6/300 2026-03-26 16:48 by 张凯十八号
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +6 小小陈小小 2026-03-22 9/450 2026-03-26 15:58 by dick_runner
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭