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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » H1299细胞中对HIF-1alpha表达用western鉴定
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waxSnail

铜虫 (小有名气)

[求助] H1299细胞中对HIF-1alpha表达用western鉴定 已有1人参与

结果出现两个问题：一个是没有用化合物处理的H1299细胞的western样品中，也有HIF-1alpha的条带？抗体说明书上说HIF-1alpha在132kDa的地方，但我跑出来时在100-130kDa之间，两次都是，不知道原因何在！
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1楼 2014-06-22 09:38:16
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万物之灵

新虫 (初入文坛)
你用的是哪家HIF-1alpha抗体
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7楼2014-09-25 10:42:47
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yangfanv

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
waxSnail: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-22 19:01:07
在遇到这样的问题时，楼主首先可以考虑一个正对照～譬如HIF-1a在低氧处理或DMOG，CocL2处理时会高表达～楼主可以用这些条件处理H1299细胞设置一个正对照看看HIF-1a的条带位置作为比对～～而且不同细胞HIF-1a有不同的修饰～～它的分子质量会在90-120KD之间（有可能也会132KD，不过我没遇到过）～～HIF-1a在正常情况下癌细胞中也会有少量的表达～H1299中有表达很正常
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路要慢慢地走～但不能停
2楼2014-06-22 18:22:59
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waxSnail

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangfanv at 2014-06-22 18:22:59
在遇到这样的问题时，楼主首先可以考虑一个正对照～譬如HIF-1a在低氧处理或DMOG，CocL2处理时会高表达～楼主可以用这些条件处理H1299细胞设置一个正对照看看HIF-1a的条带位置作为比对～～而且不同细胞HIF-1a有不同的 ...

多谢！我会尝试一下。
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3楼2014-06-22 19:01:01
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waxSnail

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangfanv at 2014-06-22 18:22:59
在遇到这样的问题时，楼主首先可以考虑一个正对照～譬如HIF-1a在低氧处理或DMOG，CocL2处理时会高表达～楼主可以用这些条件处理H1299细胞设置一个正对照看看HIF-1a的条带位置作为比对～～而且不同细胞HIF-1a有不同的 ...

高手,请问你有没有具体的诱导缺氧的实验protocol啊?最好有出处的参考文献.谢谢!
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4楼2014-06-23 13:40:35
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