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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » H1299细胞中对HIF-1alpha表达用western鉴定
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waxSnail

铜虫 (小有名气)

[求助] H1299细胞中对HIF-1alpha表达用western鉴定 已有1人参与

结果出现两个问题：一个是没有用化合物处理的H1299细胞的western样品中，也有HIF-1alpha的条带？抗体说明书上说HIF-1alpha在132kDa的地方，但我跑出来时在100-130kDa之间，两次都是，不知道原因何在！
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1楼 2014-06-22 09:38:16
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waxSnail

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangfanv at 2014-06-22 18:22:59
在遇到这样的问题时，楼主首先可以考虑一个正对照～譬如HIF-1a在低氧处理或DMOG，CocL2处理时会高表达～楼主可以用这些条件处理H1299细胞设置一个正对照看看HIF-1a的条带位置作为比对～～而且不同细胞HIF-1a有不同的 ...

多谢！我会尝试一下。
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3楼2014-06-22 19:01:01
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yangfanv

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
waxSnail: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-22 19:01:07
在遇到这样的问题时，楼主首先可以考虑一个正对照～譬如HIF-1a在低氧处理或DMOG，CocL2处理时会高表达～楼主可以用这些条件处理H1299细胞设置一个正对照看看HIF-1a的条带位置作为比对～～而且不同细胞HIF-1a有不同的修饰～～它的分子质量会在90-120KD之间（有可能也会132KD，不过我没遇到过）～～HIF-1a在正常情况下癌细胞中也会有少量的表达～H1299中有表达很正常
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路要慢慢地走～但不能停
2楼2014-06-22 18:22:59
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waxSnail

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangfanv at 2014-06-22 18:22:59
在遇到这样的问题时，楼主首先可以考虑一个正对照～譬如HIF-1a在低氧处理或DMOG，CocL2处理时会高表达～楼主可以用这些条件处理H1299细胞设置一个正对照看看HIF-1a的条带位置作为比对～～而且不同细胞HIF-1a有不同的 ...

高手,请问你有没有具体的诱导缺氧的实验protocol啊?最好有出处的参考文献.谢谢!
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4楼2014-06-23 13:40:35
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yangfanv

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-23 18:34:01
引用回帖:
4楼: Originally posted by waxSnail at 2014-06-23 13:40:35
高手,请问你有没有具体的诱导缺氧的实验protocol啊?最好有出处的参考文献.谢谢!...

低氧/缺氧诱导你可以用特定配置的低氧/缺氧混合气与你的细胞培养箱相连接～然后就可以进行低氧处理了～～或者你可以用一个专门诱导低氧的那种封闭容器～将细胞放在里面以后～用特定配置的低氧/缺氧气体往里面充气不停置换原先存在容器里面的气体～最后也可以达到低氧或缺氧的效果～～现在关于低氧的文章NCBI里面一大堆～你搜hypoxia就可以搜出一大筐的文章～～但是我估计很难搜到具体诱导低氧的protocol～～你可以请教下你们学校有没有做过这方面的实验室～其实很简单的～～祝楼主实验顺利～～
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路要慢慢地走～但不能停
5楼2014-06-23 14:25:22
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