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离子通道western blot遇到各种问题！各位大神帮忙看一下呀！
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请问各位有没有做过小鼠肾脏离子通道的western的？最近在做NCC和NKCC2遇到各种问题 第一个问题是 --- 目的蛋白的条带有时候能检测到，有时候检测不到（图1，尽最大努力调整对比度亮度，隐约有一点条带，有时候什么都看不到），条件都一样。检测到的时候NKCC2总是好几个条带 大部分类似单体和二聚体的分子大小，还有一些杂带。（图2） 第二个问题是 --- loading control 之前一直用b-actin，近期 actin总是出现两个条带（图3）， 所以就试用了a-Tubulin和GAPDH 结果非常异常（图4）。 哪位大神能帮我看看问题在哪里啊？ PS. 根据文献，离子通道的抗原性差，煮样的时候采用60度15分钟；制样采用sucrose buffer；低速离心，取上清。  fig.1 NCC NKCC2 .jpg  fig.2 NCC NKCC2.jpg  fig.3 actin.jpg  fig.4 GAPDH Tubulin actin.jpg |
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