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关于提纯小分子多肽pyoverdines除盐的问题 已有4人参与
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大家好，我本科学的事化学专业，初次做多肽纯化实验，遇到一些问题想向各位大神求教： 我想提纯一种小分子多肽pyoverdines，分子量在1300左右，先用琼脂糖柱Chelating Sepharose Fast Flow column得到了pyoverdines的粗提液然后冻干加1mL EDTA溶解，然后要用Sephadex G-15 column进行除盐，洗脱液为去离子水，但是，过完柱子所得的pyoverdines中仍然有EDTA的存在，没法得到纯的pyoverdines。我的Sephadex G-15 column是自己买填料装到玻璃柱中去的，柱子的直径为1cm,柱高15cm,只能手动加样过柱无法加压，我想请教一下各位：EDTA无法除去是因为柱子自身的原因（我听做生物的同学说蛋白纯化的时候一般不需要除去EDTA）还是因为我柱子填料没装好或者柱子的长度不够，达不到分离除尽盐的效果。另外，我还试着直接将冻干后的pyoverdines加1mL EDTA溶解后直接用孔径为500-1000分子量的透析袋用去离子水透析的方法除盐，但是，2天过去了，除盐的效果不好，监测盐含量依旧很高，想问问大家有什么能够除去小分子多肽中的EDTA的方法，谢谢大家  |
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wolfman840
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5楼2014-06-20 16:58:22
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