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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 关于提纯小分子多肽pyoverdines除盐的问题
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hufei2227

金虫 (正式写手)

[求助] 关于提纯小分子多肽pyoverdines除盐的问题 已有4人参与

大家好，我本科学的事化学专业，初次做多肽纯化实验，遇到一些问题想向各位大神求教：
      我想提纯一种小分子多肽pyoverdines，分子量在1300左右，先用琼脂糖柱Chelating Sepharose Fast Flow column得到了pyoverdines的粗提液然后冻干加1mL EDTA溶解，然后要用Sephadex G-15 column进行除盐，洗脱液为去离子水，但是，过完柱子所得的pyoverdines中仍然有EDTA的存在，没法得到纯的pyoverdines。我的Sephadex G-15 column是自己买填料装到玻璃柱中去的，柱子的直径为1cm,柱高15cm,只能手动加样过柱无法加压，我想请教一下各位：EDTA无法除去是因为柱子自身的原因（我听做生物的同学说蛋白纯化的时候一般不需要除去EDTA）还是因为我柱子填料没装好或者柱子的长度不够，达不到分离除尽盐的效果。另外，我还试着直接将冻干后的pyoverdines加1mL EDTA溶解后直接用孔径为500-1000分子量的透析袋用去离子水透析的方法除盐，但是，2天过去了，除盐的效果不好，监测盐含量依旧很高，想问问大家有什么能够除去小分子多肽中的EDTA的方法，谢谢大家
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1楼 2014-06-19 20:29:48
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以试试用阴离子交换柱进行EDTA的去除，或者用小分子量的离心超滤管。比如1KD的。
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2楼2014-06-20 09:49:50
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看这个文章的试验方法部分
http://www.docin.com/p-332498079.html&key=疲劳
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
3楼2014-06-20 10:01:00
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elise1987

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
多肽分子又不是球状的，没那么容易透出去。换换2kd的透析试试。或者错向流过滤器也可以试试。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2014-06-20 10:05:34
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by elise1987 at 2014-06-20 10:05:34
多肽分子又不是球状的，没那么容易透出去。换换2kd的透析试试。或者错向流过滤器也可以试试。

2KD的比他的多肽分子量大了，不会漏过去吗？
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5楼2014-06-20 16:58:22
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elise1987

金虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-06-20 20:58:22
2KD的比他的多肽分子量大了，不会漏过去吗？...

短时间内 透析不会透出去太多的

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6楼2014-06-20 22:51:53
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午夜星光雨

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
6楼: Originally posted by elise1987 at 2014-06-20 22:51:53
短时间内 透析不会透出去太多的
...

透析这主要是除盐，而且透析2kD只是一个平均分布范围,这样不是把所有东西都除掉了
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7楼2014-06-21 09:35:31
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elise1987

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 午夜星光雨 at 2014-06-21 13:35:31
透析这主要是除盐，而且透析2kD只是一个平均分布范围,这样不是把所有东西都除掉了...

分子量只是膜孔大小一个比较粗略的指标，主要针对球状蛋白及类似物，多肽一般来说都是链状，2K有可能会透出一些，但短时间内不会丢完。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2014-06-21 11:59:15
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