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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒双酶切 没有了条带
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
20楼: Originally posted by tomato0902 at 2014-06-24 11:30:42
一般而言，质粒提取电泳图可以看见2-3条带，也就是质粒的线性结构、开环和超螺旋结构，而你的质粒电泳图有5条带，所以感觉是质粒提取可能会有问题，不知道这两天的实验如何

谢谢你，， 这两天 实验 没有进展，，，准备使用 试剂盒 试一试
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12
21楼2014-06-24 20:23:37
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仁者无敌2013

木虫 (小有名气)
今天也赶脚碰上了。。。。
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22楼2014-06-24 22:23:59
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pansums

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

很多人都碰到过酶切之后出现smear条带，或者酶切之后跑胶就完全不见了条带，曾经就这个问题咨询过试剂供应商的技术顾问，但无解。现在自己弄明白了，大部分情况下，是因为提取的质粒中混有核酸酶，在酶切的条件下（37℃，适宜buffer，等），核酸酶就能发挥作用，于是就出现了跑胶所见的结果。几乎所有公司出售的质粒提取试剂盒都宣称可以专一性的结合DNA质粒，事实上是不可能的，没有任何一家公司可以做得到。除了结合质粒之外，还会结合较多的核酸酶、内毒素等杂质，之后的洗涤很关键，但几乎绝大部分公司（包括那些自诩为高端试剂供应商的公司）在有效去除核酸酶、内毒素方面显得无能为力，但却还会宣传自己可以去除核酸酶甚至宣传是无内毒素（全球目前没有任何一家公司可以做到“无”内毒素，当然可以做到不同程度地降低内毒素浓度）。
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23楼2015-09-06 18:18:21
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