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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒双酶切 没有了条带
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-06-20 15:53:19
说下你的酶切体系

质粒：10 ul  ， buffer tango  2 ul   ，  酶各3 ul   ，   双蒸水补足20ul ，， 过夜 酶切
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12
11楼2014-06-20 18:19:39
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leonaliu2013

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-21 00:57:28
永峰1230: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-21 15:11:57
过夜切太久了，3-4小时为好。觉得是切碎了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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12楼2014-06-20 18:48:54
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cm8002

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-21 00:57:35
永峰1230: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-21 15:12:06
这酶用着不心痛啊，20微升体系用酶总量两微升足够了，提的质粒电泳时可一起加上好判断

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13楼2014-06-20 23:59:42
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by leonaliu2013 at 2014-06-20 18:48:54
过夜切太久了，3-4小时为好。觉得是切碎了。

嗯好的，谢谢你，我试一试

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12
14楼2014-06-21 10:54:57
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by cm8002 at 2014-06-20 23:59:42
这酶用着不心痛啊，20微升体系用酶总量两微升足够了，提的质粒电泳时可一起加上好判断

嗯，，实验室之前是这样的，，我试一试，，谢谢你啊

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12
15楼2014-06-21 10:55:46
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by leonaliu2013 at 2014-06-20 18:48:54
过夜切太久了，3-4小时为好。觉得是切碎了。

嗯好的，谢谢你，我试一试

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12
16楼2014-06-21 11:02:03
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zyllucky at 2014-06-20 14:38:50
少加一些酶或者酶切时间短一些（4h）试试，可以同时加上分别单酶切的对照，便于查找原因。

内切酶 ，不是一个公司的，，fermentas  /thermo  可以  一起酶切吗
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12
17楼2014-06-21 15:38:06
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tomato0902

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
永峰1230(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-21 19:10:49
永峰1230: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢你，，正在 重新提取 质粒，，你说的 质粒提的不太好，是说 条带暗吗？ 上面有5条带 ，正常吗 2014-06-22 09:57:01
如果紧挨着Marker的是提取的质粒的话，感觉质粒提的就不太好，其次，双酶切的泳道表现看是呗完全降解了，所以建议：重新提质粒，分别单酶切，如果都没有问题，再双酶切，而且双酶切时间可能过长了，一般都有说明的，根据说明的建议酶切时间试试
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18楼2014-06-21 16:34:46
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tomato0902

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by tomato0902 at 2014-06-21 16:34:46
如果紧挨着Marker的是提取的质粒的话，感觉质粒提的就不太好，其次，双酶切的泳道表现看是呗完全降解了，所以建议：重新提质粒，分别单酶切，如果都没有问题，再双酶切，而且双酶切时间可能过长了，一般都有说明的， ...

一般而言，正常质粒提取应该可见2-3条带，也就是质粒的开环、线性和超螺旋结构，你的电泳图上有5条带，所以觉得可鞥质粒提取不太好，不知道这两天情况质粒提取有无改观
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19楼2014-06-24 11:27:52
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tomato0902

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一般而言，质粒提取电泳图可以看见2-3条带，也就是质粒的线性结构、开环和超螺旋结构，而你的质粒电泳图有5条带，所以感觉是质粒提取可能会有问题，不知道这两天的实验如何
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永峰1230
20楼2014-06-24 11:30:42
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