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永峰1230铜虫 (小有名气)
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[求助]
质粒双酶切 没有了条带 已有7人参与
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-----------------双酶切 过夜，之后跑电泳， 3-5 泳道， 是双酶切 ，没有了 质粒， 没有明显的条带，，，只有 不太明显的 弥散的 拖带，，请问这是 什么原因呢。。。。。谢谢 谢谢谢谢  |
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【答案】应助回帖
| 很多人都碰到过酶切之后出现smear条带，或者酶切之后跑胶就完全不见了条带，曾经就这个问题咨询过试剂供应商的技术顾问，但无解。现在自己弄明白了，大部分情况下，是因为提取的质粒中混有核酸酶，在酶切的条件下（37℃，适宜buffer，等），核酸酶就能发挥作用，于是就出现了跑胶所见的结果。几乎所有公司出售的质粒提取试剂盒都宣称可以专一性的结合DNA质粒，事实上是不可能的，没有任何一家公司可以做得到。除了结合质粒之外，还会结合较多的核酸酶、内毒素等杂质，之后的洗涤很关键，但几乎绝大部分公司（包括那些自诩为高端试剂供应商的公司）在有效去除核酸酶、内毒素方面显得无能为力，但却还会宣传自己可以去除核酸酶甚至宣传是无内毒素（全球目前没有任何一家公司可以做到“无”内毒素，当然可以做到不同程度地降低内毒素浓度）。 |
23楼2015-09-06 18:18:21
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[ 发自小木虫客户端 ] |
2楼2014-06-19 16:44:09
3楼2014-06-20 07:25:41
永峰1230
铜虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 239.8
- 散金: 8
- 帖子: 251
- 在线: 108.7小时
- 虫号: 2638768
- 注册: 2013-09-06
- 性别: GG
- 专业: 食品加工技术
4楼2014-06-20 14:32:59
