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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒双酶切 没有了条带
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永峰1230

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒双酶切 没有了条带 已有7人参与

-----------------双酶切 过夜，之后跑电泳，  3-5 泳道， 是双酶切  ，没有了 质粒，  没有明显的条带，，，只有 不太明显的 弥散的 拖带，，请问这是 什么原因呢。。。。。谢谢 谢谢谢谢   
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12
1楼 2014-06-19 16:31:35
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pansums

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

很多人都碰到过酶切之后出现smear条带，或者酶切之后跑胶就完全不见了条带，曾经就这个问题咨询过试剂供应商的技术顾问，但无解。现在自己弄明白了，大部分情况下，是因为提取的质粒中混有核酸酶，在酶切的条件下（37℃，适宜buffer，等），核酸酶就能发挥作用，于是就出现了跑胶所见的结果。几乎所有公司出售的质粒提取试剂盒都宣称可以专一性的结合DNA质粒，事实上是不可能的，没有任何一家公司可以做得到。除了结合质粒之外，还会结合较多的核酸酶、内毒素等杂质，之后的洗涤很关键，但几乎绝大部分公司（包括那些自诩为高端试剂供应商的公司）在有效去除核酸酶、内毒素方面显得无能为力，但却还会宣传自己可以去除核酸酶甚至宣传是无内毒素（全球目前没有任何一家公司可以做到“无”内毒素，当然可以做到不同程度地降低内毒素浓度）。
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23楼2015-09-06 18:18:21
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
　

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-06-19 16:44:09
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meng_xu

铜虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-21 00:56:45
star activity有可能是原因之一，不过看不到图片，只是猜测而已
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3楼2014-06-20 07:25:41
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-06-19 16:44:09
　

你好，这是 我的图片 ，谢谢你
质粒双酶切 没有了条带
6.17  meiqie   A chanqu chunhua.jpg
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12
4楼2014-06-20 14:32:59
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