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永峰1230

铜虫 (小有名气)

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专业: 食品加工技术

[求助] 质粒双酶切没有了条带已有7人参与

-----------------双酶切过夜，之后跑电泳， 3-5 泳道，是双酶切，没有了质粒，没有明显的条带，，，只有不太明显的弥散的拖带，，请问这是什么原因呢。。。。。谢谢谢谢谢谢

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1楼 2014-06-19 16:31:35

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pansums

新虫 (初入文坛)

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专业: 细胞信号转导

【答案】应助回帖

很多人都碰到过酶切之后出现smear条带，或者酶切之后跑胶就完全不见了条带，曾经就这个问题咨询过试剂供应商的技术顾问，但无解。现在自己弄明白了，大部分情况下，是因为提取的质粒中混有核酸酶，在酶切的条件下（37℃，适宜buffer，等），核酸酶就能发挥作用，于是就出现了跑胶所见的结果。几乎所有公司出售的质粒提取试剂盒都宣称可以专一性的结合DNA质粒，事实上是不可能的，没有任何一家公司可以做得到。除了结合质粒之外，还会结合较多的核酸酶、内毒素等杂质，之后的洗涤很关键，但几乎绝大部分公司（包括那些自诩为高端试剂供应商的公司）在有效去除核酸酶、内毒素方面显得无能为力，但却还会宣传自己可以去除核酸酶甚至宣传是无内毒素（全球目前没有任何一家公司可以做到“无”内毒素，当然可以做到不同程度地降低内毒素浓度）。