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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于原核表达和SDS-PAGE
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tody4617

木虫 (小有名气)

一根筋家族之独根草

[交流] 关于原核表达和SDS-PAGE

我用IPTG诱导BL21表达,载体是PGEX-4T-2,然后SDS-PAGE,发现电泳条带十分模糊,不知什么原因,请高手帮忙!
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票子-房子-车子-婆子-儿子
1楼 2008-03-25 22:13:21
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yufuxian

木虫 (著名写手)
★
tody4617(金币+1,VIP+0):谢谢！！
是不是你跑电泳时,胶配的有问题,或是电泳缓冲液的问题,建议重新配制.
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2楼2008-03-25 23:09:07
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
marker如何？如果模糊就是胶的问题或电泳掌握的不好，如果清晰说明样品有问题。
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细推物理须行乐。
3楼2008-03-26 08:18:46
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tody4617

木虫 (小有名气)

一根筋家族之独根草
谢谢,我再跑下!
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票子-房子-车子-婆子-儿子
4楼2008-03-26 08:37:17
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yufuxian

木虫 (著名写手)
有的时候你的菌煮沸时没有裂解开也会出现这样的问题.
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5楼2008-03-26 12:53:44
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tody4617

木虫 (小有名气)

一根筋家族之独根草
在开水中煮了5分钟,应该会煮破的吧!
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票子-房子-车子-婆子-儿子
6楼2008-03-26 14:31:02
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by yufuxian at 2008-3-26 12:53:
有的时候你的菌煮沸时没有裂解开也会出现这样的问题.

我常用的是煮十分钟
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7楼2008-03-26 17:57:50
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tody4617

木虫 (小有名气)

一根筋家族之独根草
谢谢,我也煮10分钟试试!
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票子-房子-车子-婆子-儿子
8楼2008-03-26 18:06:43
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long0553299

我个人觉得你的问题是缓冲液的PH没调!
上层浓缩胶的Tris-cl PH应调至6.8一定要准,胶是否清晰取决于浓缩胶浓缩的过程;第二,电泳液PH8.3,不准也会影响清晰度呢;3,分离胶 Tris-cl PH8.8.
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9楼2008-03-26 22:35:18
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tody4617

木虫 (小有名气)

一根筋家族之独根草
我用pH计调得，应该没错！！
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票子-房子-车子-婆子-儿子
10楼2008-03-27 09:15:32
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