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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

[交流] 关于酶切

我想回收连接在体载体上的目的条带然后和PET连接，我想问下，切多少质粒才够呢？大家的大量酶切体系是怎么弄的？谢谢
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1楼 2008-03-25 10:59:48
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shenqicc

金虫 (小有名气)
一般要看你是单酶切还是双酶切了，我一般都是参看买来的Takara的内切酶的说明书的，切的总体系一般20μl就够了，除了加的酶和缓冲液之外全加的质粒！~~
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2楼2008-03-25 11:08:33
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ypan

木虫 (著名写手)
为什么要双酶切？用PCR重新P一次，比你切胶回收的要多得多！只要你的引物上有对应的酶切位点，PCR之后，纯化产物，然后双酶切，纯化酶切产物，与用同样酶切载体连接就可以了！
当然PCR电泳时候要只有一条目的条带才可以用纯化试剂盒，要是有其他的带，还是要切胶回收！但是方法还是差不多！
祝你好运！
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3楼2008-03-25 11:17:30
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long0553299

直接切也是可以的,不过量回收量可能会少点,建议20u体积;或者用三楼的方法,重设一对引物加酶切位点的,PCR产物5u,15u体系就OK了,这样做的成功率高一点
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4楼2008-03-25 11:37:37
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