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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

[交流] 关于酶切

我想回收连接在体载体上的目的条带然后和PET连接,我想问下,切多少质粒才够呢?大家的大量酶切体系是怎么弄的?谢谢
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shenqicc

金虫 (小有名气)

一般要看你是单酶切还是双酶切了,我一般都是参看买来的Takara的内切酶的说明书的,切的总体系一般20μl就够了,除了加的酶和缓冲液之外全加的质粒!~~
Publish OR Perish!
2楼2008-03-25 11:08:33
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ypan

木虫 (著名写手)

为什么要双酶切?用PCR重新P一次,比你切胶回收的要多得多!只要你的引物上有对应的酶切位点,PCR之后,纯化产物,然后双酶切,纯化酶切产物,与用同样酶切载体连接就可以了!
当然PCR电泳时候要只有一条目的条带才可以用纯化试剂盒,要是有其他的带,还是要切胶回收!但是方法还是差不多!
祝你好运!
3楼2008-03-25 11:17:30
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long0553299

直接切也是可以的,不过量回收量可能会少点,建议20u体积;或者用三楼的方法,重设一对引物加酶切位点的,PCR产物5u,15u体系就OK了,这样做的成功率高一点
4楼2008-03-25 11:37:37
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