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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：酶切连接后序列改变
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linxianfan

[交流] 求助：酶切连接后序列改变

ECOR I酶切连接后应该是GAATTC这样的序列吧，为什么测序结果显示为GAATTAATTC，多了AATT四个碱基，这是什么原因呢？我是要做融合基因表达的，两个基因通过ECOR I酶切连接，连接后PCR扩增。现在这样的结果会影响表达的吧，我该如何处理呢？请指教，谢谢！
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1楼 2008-03-25 08:21:19
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
先确定下你测序有没有问题吧。要不就是发生粘性末端补平的连接，确定下连接酶是不是有问题吧。
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2楼2008-03-25 10:27:56
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annwt

木虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
有时测序公司讲，前50或者20不准，你可以咨询一下公司再分析。
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3楼2008-03-25 10:31:09
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long0553299

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx,
建议:1,将你的两个目的基因都克隆到T载体,测序比对序列是否正确;2,把两条目的基因连到一个载体,再测,比对;再将融合的连入表达载体,这样的成功率会高一点,而且你也可以判断目的片段是否正确
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4楼2008-03-25 11:45:43
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linxianfan

谢谢各位！两个基因分别连到克隆载体上，然后酶切分段连接到表达载体上准确性会高一点吗？还想请问一下什么情况下会发生粘性末端补平的连接，该怎么避免呢？

[ Last edited by linxianfan on 2008-3-26 at 08:14 ]
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5楼2008-03-26 08:13:01
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