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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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linxianfan

[交流] 求助:酶切连接后序列改变

ECOR I酶切连接后应该是GAATTC这样的序列吧,为什么测序结果显示为GAATTAATTC,多了AATT四个碱基,这是什么原因呢?我是要做融合基因表达的,两个基因通过ECOR I酶切连接,连接后PCR扩增。现在这样的结果会影响表达的吧,我该如何处理呢?请指教,谢谢!
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
先确定下你测序有没有问题吧。要不就是发生粘性末端补平的连接,确定下连接酶是不是有问题吧。
2楼2008-03-25 10:27:56
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annwt

木虫 (正式写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,
有时测序公司讲,前50或者20不准,你可以咨询一下公司再分析。
3楼2008-03-25 10:31:09
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long0553299

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx,
建议:1,将你的两个目的基因都克隆到T载体,测序比对序列是否正确;2,把两条目的基因连到一个载体,再测,比对;再将融合的连入表达载体,这样的成功率会高一点,而且你也可以判断目的片段是否正确
4楼2008-03-25 11:45:43
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linxianfan

谢谢各位!两个基因分别连到克隆载体上,然后酶切分段连接到表达载体上准确性会高一点吗?还想请问一下什么情况下会发生粘性末端补平的连接,该怎么避免呢?

[ Last edited by linxianfan on 2008-3-26 at 08:14 ]
5楼2008-03-26 08:13:01
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