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shji03zhangjing

铜虫 (小有名气)

[交流] 电泳没条带 请高手帮我分析分析 拜托大家

今天实验课,提取的DNA,OD260/OD280=1.76,还算可以,可是经过PCR扩增,电泳却没条带,不知道是怎么回事。加样孔处很亮,跟同学们一起跑的,应该不是胶的问题,因为没接触过这个,所以请大家帮我分析分析,谢谢
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再见苏摩

银虫 (初入文坛)

同意楼上的,不过我觉得没必要改用聚丙烯酰胺胶,它不存在分离问题吧

首先要问下,你扩增的带有多大,如果带比200bp还小,胶跑久了很容易看不见的,如果带比较大,PCR失败几率要大些

再者,模板很重要,你仅检测了OD值,应该先点样看看浓度

PCR的东西加样孔处很亮应该不是模板蛋白质多的原因——模板在整个PCR体系中含量很少了.....我们偶尔会遇到这样的情况,有可能是污染了,不过基本可以忽略它带来的影响,也就是说它应该不是你没有扩增带的原因
7楼2008-04-17 11:12:01
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GinTonic

金虫 (小有名气)

应该是没有扩出来吧
2楼2008-03-24 23:48:53
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shuchang

金虫 (初入文坛)


reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.不敢确定你的方法,先送一个.
可能是模板加多了,你把模板稀释100倍再PCR试试
3楼2008-03-25 01:45:14
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greenspringmi

银虫 (正式写手)

样孔里有东西,有可能是蛋白抽提的不干净。
你的提取方法是CTAB的话,可以用苯酚和氯仿抽提三次,尽量把蛋白除干净
4楼2008-03-25 09:30:28
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