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shji03zhangjing

铜虫 (小有名气)

[交流] 电泳没条带 请高手帮我分析分析 拜托大家

今天实验课，提取的DNA,OD260/OD280=1.76,还算可以，可是经过PCR扩增，电泳却没条带，不知道是怎么回事。加样孔处很亮，跟同学们一起跑的，应该不是胶的问题，因为没接触过这个，所以请大家帮我分析分析,谢谢
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1楼 2008-03-24 22:27:02
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GinTonic

金虫 (小有名气)
应该是没有扩出来吧
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2楼2008-03-24 23:48:53
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shuchang

金虫 (初入文坛)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.不敢确定你的方法,先送一个.
可能是模板加多了，你把模板稀释100倍再PCR试试
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3楼2008-03-25 01:45:14
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greenspringmi

银虫 (正式写手)
样孔里有东西，有可能是蛋白抽提的不干净。
你的提取方法是CTAB的话，可以用苯酚和氯仿抽提三次，尽量把蛋白除干净
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4楼2008-03-25 09:30:28
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
PCR能不能出来有很多原因，不光是模版的问题，包括PCR的体系程序等很多问题。再找下其他原因吧，也可以电泳鉴定下你的模版DNA。
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5楼2008-03-25 10:31:13
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yangjian8411

应该先用琼脂糖电泳泡泡看你的DNA模板如何，看看是否是DNA降解还是蛋白质含量太高，如果这两者都不是，那就证明你的模板没有问题了。下一步应该去看看你的PCR反应体系有没有问题，有没有少加什么药品。如果没有就要看看你的PCR程序了，加样孔比较亮，说明你是用的琼脂糖胶跑的电泳，而不是用的聚丙烯酰胺胶，可以试试用聚丙烯酰胺胶，分离比较明显。从加样孔比较亮，可能是你的样有问题了，应该是蛋白质含量比较多，蛋白质跑的比DNA慢，所以一般来说会留在加样孔附近
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6楼2008-04-17 09:38:27
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再见苏摩

银虫 (初入文坛)
同意楼上的，不过我觉得没必要改用聚丙烯酰胺胶，它不存在分离问题吧

首先要问下，你扩增的带有多大，如果带比200bp还小，胶跑久了很容易看不见的，如果带比较大，PCR失败几率要大些

再者，模板很重要，你仅检测了OD值，应该先点样看看浓度

PCR的东西加样孔处很亮应该不是模板蛋白质多的原因——模板在整个PCR体系中含量很少了.....我们偶尔会遇到这样的情况，有可能是污染了，不过基本可以忽略它带来的影响，也就是说它应该不是你没有扩增带的原因
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7楼2008-04-17 11:12:01
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