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Z深白色J

新虫 (初入文坛)

[求助] 求帮助!基因连接克隆载体后转化大肠杆菌,两天了都没长出菌。。。 已有6人参与

我的目的基因片段回收后与克隆载体连接,转化大肠杆菌涂板后长了两天都没长出菌,是感受态不好吗?请各位大神帮我找找原因,分析一下问题出在哪里,谢谢!
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路尽繁华

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by ivyvampire at 2014-06-18 13:00:44
哎,平时多做对照就能找到原因了,转化无非就是平板,连接产物没连上,感受态有问题,建议你系统的做一个对照,把以上因素考虑进去就行了
仔细点说就是用实验已有抗性的菌划你那板,看板有没问题(我个人觉得你板上 ...

转化后长出几个菌落,但是pcr阳筛不出目的片段,请问这是没连接成功吗?
11楼2014-12-29 22:05:51
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ltfe567

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-14 21:33:10
我的也是,后来室温放置了几天慢慢才有,咨询技术支持说是让检查下感受态细胞,估计是感受态的问题
2楼2014-06-14 16:24:32
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miao1992

新虫 (初入文坛)


没有连上去啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2014-06-14 19:34:55
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流! 2014-06-16 12:34:12
转化不长菌的原因很多。1感受态细胞不行,这个一般都是同时转化一个已知的质粒,如果质粒长了,就可以排除。2转化过程发生错误,同样用质粒做对照。3抗生素加错了或者抗生素浓度过高。4连接不成功。转化时连接产物的浓度最起码要十几纳克,如果只有几纳克,转化效率再低点,就不长菌了。另外如果是平末端连接的话,效率更低。
做转化要加对照的,一个阳性一个阴性。你这样不加对照去做,很难找到失败的原因。
4楼2014-06-15 14:53:14
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