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showzoo

银虫 (小有名气)

[交流] T载体和表达载体

本人刚进实验室,知识贫乏。看文献和资料时有很多不明白之处。
其中一个就是T载体和表达载体的区别在哪里? 还有就是转化用的工程菌有什么讲究吗?我见有什么DH5a,BL21的了有什么区别?可以混用吗?
望各位高手,前辈们指点,最好能小弟系统的上一堂有关载体的课,有这方面的资料也行。小弟感激不尽!!
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lazylord

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by showzoo at 2008-3-25 18:11:

哦 终于理顺点了 但是我不明白的一点就是 目的片段的克隆不是用PCR就行了吗? 为什么要接到T载体上再酶切后连到表达载体里呢?不是又多了一步吗

对`我也不理解这个,为什么多次一步..我也正做一样的这些东西,非常受教``谢谢了`连接T载体后在连表达载体是不是有什么目的后者是这样更能连得上么?
觅一方静土,养一方人!上下求索可知方隅?孜孜自攻岂在方寸之间?
9楼2008-06-10 21:02:57
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long0553299

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):鼓励讨论和互相学习!
针对你的问题:T载体是用来克隆的,就是基因扩增的一种方法,DH5a就是做T的工程菌;表达载体顾名思义就是做表达用的,把目的基因接入表达载体,转入适合的工程菌,利用生物工程法获得大量你所需要的蛋白的一种方法,如pET系列表达载体就可以转入BL21细菌中.      仅供参考!
2楼2008-03-24 18:00:31
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showzoo

银虫 (小有名气)

非常感谢long0553299,学习中.
希望得到更多人的指点。
3楼2008-03-24 20:59:48
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shenqicc

金虫 (小有名气)

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢指教!能者为师!
T载体主要用于目的基因的克隆,而表达载体是用于目的基因的表达的,转化用的工程菌可以根据用途不同分为克隆宿主和表达宿主菌,这两者的代表菌株主要有:克隆宿主:DH5a,JM109等,表达宿主:BL21等,两者转化之后的效果也是不一样的,如JM109转化后长出的菌落接种后提出的质粒就比从BL21中提出的质粒要好得多!
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4楼2008-03-24 21:42:31
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