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showzoo

银虫 (小有名气)

[交流] T载体和表达载体

本人刚进实验室,知识贫乏。看文献和资料时有很多不明白之处。
其中一个就是T载体和表达载体的区别在哪里? 还有就是转化用的工程菌有什么讲究吗?我见有什么DH5a,BL21的了有什么区别?可以混用吗?
望各位高手,前辈们指点,最好能小弟系统的上一堂有关载体的课,有这方面的资料也行。小弟感激不尽!!
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long0553299

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):鼓励讨论和互相学习!
针对你的问题:T载体是用来克隆的,就是基因扩增的一种方法,DH5a就是做T的工程菌;表达载体顾名思义就是做表达用的,把目的基因接入表达载体,转入适合的工程菌,利用生物工程法获得大量你所需要的蛋白的一种方法,如pET系列表达载体就可以转入BL21细菌中.      仅供参考!
2楼2008-03-24 18:00:31
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showzoo

银虫 (小有名气)

非常感谢long0553299,学习中.
希望得到更多人的指点。
3楼2008-03-24 20:59:48
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shenqicc

金虫 (小有名气)

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢指教!能者为师!
T载体主要用于目的基因的克隆,而表达载体是用于目的基因的表达的,转化用的工程菌可以根据用途不同分为克隆宿主和表达宿主菌,这两者的代表菌株主要有:克隆宿主:DH5a,JM109等,表达宿主:BL21等,两者转化之后的效果也是不一样的,如JM109转化后长出的菌落接种后提出的质粒就比从BL21中提出的质粒要好得多!
Publish OR Perish!
4楼2008-03-24 21:42:31
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 关注,.
T载体一般从公司购买,为线状,可与TAQ酶扩增的目的基因直接进行连接。PET载体是用来表达蛋白质的,一般保存在大肠杆菌里,可同实验室的同行求要,与目的基因连接时需要经过酶切等步骤,可根据目的片段选取合适的限制性内切酶进行。
5楼2008-03-25 10:43:31
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showzoo

银虫 (小有名气)


哦 终于理顺点了 但是我不明白的一点就是 目的片段的克隆不是用PCR就行了吗? 为什么要接到T载体上再酶切后连到表达载体里呢?不是又多了一步吗
6楼2008-03-25 18:11:09
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cmh79

银虫 (小有名气)

一般如果不清楚所提取的是不是目的DNA,需要先克隆,分析后再做表达;PCR产物一般的引物可能没有相应的酶切位点(也可以设计时加上去),要先用TA克隆载体克隆,转化后提取出来再做酶切连接。

还有克隆到表达载体中要注意ORF是否与载体正确连接(不管是融合表达还是直接接在表达元件下的)

具体的要做过这类试验的高手来解答了
7楼2008-03-26 14:01:01
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王者之心

学习一下啊          呵呵
8楼2008-06-09 23:32:17
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lazylord

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by showzoo at 2008-3-25 18:11:

哦 终于理顺点了 但是我不明白的一点就是 目的片段的克隆不是用PCR就行了吗? 为什么要接到T载体上再酶切后连到表达载体里呢?不是又多了一步吗

对`我也不理解这个,为什么多次一步..我也正做一样的这些东西,非常受教``谢谢了`连接T载体后在连表达载体是不是有什么目的后者是这样更能连得上么?
觅一方静土,养一方人!上下求索可知方隅?孜孜自攻岂在方寸之间?
9楼2008-06-10 21:02:57
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louxinlong

木虫 (小有名气)

T载体方便测序,以确认克隆到正确的序列
10楼2008-06-11 11:00:52
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