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showzoo

银虫 (小有名气)

[交流] T载体和表达载体

本人刚进实验室，知识贫乏。看文献和资料时有很多不明白之处。
其中一个就是T载体和表达载体的区别在哪里？ 还有就是转化用的工程菌有什么讲究吗？我见有什么DH5a，BL21的了有什么区别？可以混用吗？
望各位高手，前辈们指点，最好能小弟系统的上一堂有关载体的课，有这方面的资料也行。小弟感激不尽！！
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1楼 2008-03-24 17:40:29
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long0553299

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):鼓励讨论和互相学习！
针对你的问题:T载体是用来克隆的,就是基因扩增的一种方法,DH5a就是做T的工程菌;表达载体顾名思义就是做表达用的,把目的基因接入表达载体,转入适合的工程菌,利用生物工程法获得大量你所需要的蛋白的一种方法,如pET系列表达载体就可以转入BL21细菌中.      仅供参考!
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2楼2008-03-24 18:00:31
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showzoo

银虫 (小有名气)
非常感谢long0553299，学习中.
希望得到更多人的指点。
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3楼2008-03-24 20:59:48
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shenqicc

金虫 (小有名气)
★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢指教！能者为师！
T载体主要用于目的基因的克隆，而表达载体是用于目的基因的表达的，转化用的工程菌可以根据用途不同分为克隆宿主和表达宿主菌，这两者的代表菌株主要有：克隆宿主：DH5a，JM109等，表达宿主：BL21等，两者转化之后的效果也是不一样的，如JM109转化后长出的菌落接种后提出的质粒就比从BL21中提出的质粒要好得多！
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4楼2008-03-24 21:42:31
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 关注,.
T载体一般从公司购买，为线状，可与TAQ酶扩增的目的基因直接进行连接。PET载体是用来表达蛋白质的，一般保存在大肠杆菌里，可同实验室的同行求要，与目的基因连接时需要经过酶切等步骤，可根据目的片段选取合适的限制性内切酶进行。
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5楼2008-03-25 10:43:31
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showzoo

银虫 (小有名气)

哦 终于理顺点了 但是我不明白的一点就是 目的片段的克隆不是用PCR就行了吗？ 为什么要接到T载体上再酶切后连到表达载体里呢？不是又多了一步吗
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6楼2008-03-25 18:11:09
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cmh79

银虫 (小有名气)
一般如果不清楚所提取的是不是目的DNA，需要先克隆，分析后再做表达；PCR产物一般的引物可能没有相应的酶切位点（也可以设计时加上去），要先用TA克隆载体克隆，转化后提取出来再做酶切连接。

还有克隆到表达载体中要注意ORF是否与载体正确连接（不管是融合表达还是直接接在表达元件下的）

具体的要做过这类试验的高手来解答了
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7楼2008-03-26 14:01:01
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王者之心

学习一下啊          呵呵
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8楼2008-06-09 23:32:17
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lazylord

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by showzoo at 2008-3-25 18:11:

哦 终于理顺点了 但是我不明白的一点就是 目的片段的克隆不是用PCR就行了吗？ 为什么要接到T载体上再酶切后连到表达载体里呢？不是又多了一步吗

对`我也不理解这个,为什么多次一步..我也正做一样的这些东西,非常受教``谢谢了`连接T载体后在连表达载体是不是有什么目的后者是这样更能连得上么?
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觅一方静土，养一方人！上下求索可知方隅？孜孜自攻岂在方寸之间？
9楼2008-06-10 21:02:57
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louxinlong

木虫 (小有名气)
T载体方便测序,以确认克隆到正确的序列
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10楼2008-06-11 11:00:52
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