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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 高分悬赏，求助DGGE图，为什么这样弥散？
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圣迭戈

铜虫 (小有名气)

[求助] 高分悬赏，求助DGGE图，为什么这样弥散？ 已有2人参与

高分悬赏，求助DGGE图，为什么这样弥散？
 \"高分悬赏，求助DGGE图，为什么这样弥散？-1\"
这个是照片，请大神帮看看。
PCR得到的条带单一，亮度很亮。
片段长度大概500多，使用了8%的胶，25%-55%,100V，15h，
个人感觉程序应该没问题，因为看到的paper上是这样写的，效果也挺好。
可能的原因参考：跑DGGE前DNA放了将近1天，此外上样有点多，差不多60微升。。。
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1楼 2014-06-13 21:30:30
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ltfe567

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
圣迭戈(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-14 21:00:43
电泳液时间过长，变性浓度问题，再有是PCR质量不高，很多原因
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2楼2014-06-14 15:24:30
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圣迭戈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-06-14 15:24:30
电泳液时间过长，变性浓度问题，再有是PCR质量不高，很多原因

电泳时间应该还好吧，paper上就是这么长，因为这个片段比较长吧。变性浓度问题具体指的是什么啊？PCR质量挺好的，只有单一的条带，而且很亮。
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3楼2014-06-15 22:51:40
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ltfe567

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 圣迭戈 at 2014-06-15 22:51:40
电泳时间应该还好吧，paper上就是这么长，因为这个片段比较长吧。变性浓度问题具体指的是什么啊？PCR质量挺好的，只有单一的条带，而且很亮。...

就是变性剂的浓度，尿素和甲酰胺的梯度范围
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4楼2014-06-16 07:52:05
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Donnawang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果pcr没问题的话，就是调一下浓度了，还有上样不要太多
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5楼2014-06-16 08:50:47
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圣迭戈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Donnawang at 2014-06-16 08:50:47
如果pcr没问题的话，就是调一下浓度了，还有上样不要太多

上样量一般多少比较合适啊？
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6楼2014-06-20 23:33:06
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