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圣迭戈

铜虫 (小有名气)

[求助] 高分悬赏,求助DGGE图,为什么这样弥散? 已有2人参与

高分悬赏,求助DGGE图,为什么这样弥散?
 \"高分悬赏,求助DGGE图,为什么这样弥散?-1\"
这个是照片,请大神帮看看。
PCR得到的条带单一,亮度很亮。
片段长度大概500多,使用了8%的胶,25%-55%,100V,15h,
个人感觉程序应该没问题,因为看到的paper上是这样写的,效果也挺好。
可能的原因参考:跑DGGE前DNA放了将近1天,此外上样有点多,差不多60微升。。。
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ltfe567

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
圣迭戈(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-14 21:00:43
电泳液时间过长,变性浓度问题,再有是PCR质量不高,很多原因
2楼2014-06-14 15:24:30
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圣迭戈

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-06-14 15:24:30
电泳液时间过长,变性浓度问题,再有是PCR质量不高,很多原因

电泳时间应该还好吧,paper上就是这么长,因为这个片段比较长吧。变性浓度问题具体指的是什么啊?PCR质量挺好的,只有单一的条带,而且很亮。
3楼2014-06-15 22:51:40
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ltfe567

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 圣迭戈 at 2014-06-15 22:51:40
电泳时间应该还好吧,paper上就是这么长,因为这个片段比较长吧。变性浓度问题具体指的是什么啊?PCR质量挺好的,只有单一的条带,而且很亮。...

就是变性剂的浓度,尿素和甲酰胺的梯度范围
4楼2014-06-16 07:52:05
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Donnawang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果pcr没问题的话,就是调一下浓度了,还有上样不要太多
5楼2014-06-16 08:50:47
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圣迭戈

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Donnawang at 2014-06-16 08:50:47
如果pcr没问题的话,就是调一下浓度了,还有上样不要太多

上样量一般多少比较合适啊?
6楼2014-06-20 23:33:06
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